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研究目的：1、采用分子生物学的技术,研究化瘀降浊汤对肾小管上皮细胞(HK-2) EMT相关形态、分子标记、浸润能力及TGF-β/Smad信号通路活性的影响。2、揭示化瘀降浊汤抑制HK-2细胞EMT和抗肾小管纤维化的分子机制。研究意义：1、证实化瘀降浊汤通过抑制TGF-β/Smad信号通路逆转HK-2细胞EMT,具有抗肾小管纤维化作用。2、深入探讨化瘀降浊汤的治疗梗阻性肾病的生物学特征,为中医药治疗梗阻性肾病提供可借鉴的治疗方法。研究方法：1、化瘀降浊汤对TGF-β诱导的HK-2细胞形态学的研究：显微镜下直接观察细胞外观,判断化瘀降浊汤对HK-2细胞形态影响。2、化瘀降浊汤对TGF-β诱导的HK-2细胞浸润能力的研究：将不同浓度的化瘀降浊汤处理的肾小管上皮细胞在Matrigel transwell小室中培养后,通过穿透Matrigel的细胞数量,比较各组间浸润能力的差异。3、化瘀降浊汤对TGF-β诱导的HK-2细胞EMT特征性分子标记的影响：用不同浓度化瘀降浊汤处理诱导后HK-2细胞,通过RT-PCR检测HK-2细胞E-cadherin mRNA. Snail mRNA、a-SMA mRNA、FSP-1 mRNA表达：通过Western blot检测E-cadherin、 Snail、a-SMA、FSP-1等蛋白的表达。4、化瘀降浊汤通过抑制TGF-β/Smad信号通路逆转HK-2细胞EMT的体外研究：通过RT-PCR检测HK-2细胞α-SMAmRNA、Snail mRNA、E-cadherin mRNA、Smad2 mRNA、Smad3 mRNA、Smad7 mRNA表达；通过Western blot检测E-cadherin. Smad2、 Smad7、α-SMA、Smad3、Snail等蛋白的表达。研究结果：1、化瘀降浊汤能够抑制TGF-β诱导的HK-2细胞增殖,并随着浓度增加,抑制率增加,根据统计结果,运用MTT比色法得出IC50为472.017 μg/ml,为便于计算取500 u g/ml。低剂量取取1/2倍值250μg/ml,高剂量取2倍值1000 μ g/ml。2、Transwell迁移实验结果显示：诱导组(255.89±15.726)与正常组(25.72+5.976)比较,具有显著的统计学意义(P<0.01),说明HK-2细胞发生EMT的模型成功：高剂量(155.39±20.201)与诱导组(255.89±15.726)比较,具有显著的统计学意义(P<0.01)。3、RT-PCR结果显示：对于FSP-1 mRNA、α-SMA mRNA、E-cadherin mRNA、Snail mRNA表达,高剂量组与诱导组比较时,有显著性统计学意义(P<0.01); Western Blot结果显示：对于FSP-1、α-SMA、E-cadherin、Snail蛋白的表达,高剂量组与诱导组比较时,有显著性统计学意义(P<0.01)。4、通过多因素方差分析,RT-PCR结果显示：α-SMA mRNA、Snail mRNA、E-cadherin mRNA、Smad2 mRNA、Smad3 mRNA、Smad7 mRNA的表达,在48h时,高剂量组较诱导组比较时,两者有显著性统计学意义(P<0.01)；Western Blot结果显示：α-SMA、Snail、E-cadherin、Smad2、Smad3、Smad7蛋白的表达,在48h时,高剂量组组较诱导组比较时,两者有显著性统计学意义(P<0.01)。结论及意义：TGF-β能够诱导的HK-2细胞发生EMT,化瘀降浊汤能够在抑制TGF-β诱导HK-2发生EMT后的细胞增殖,呈现出一定的量效关系；Transwell实验结果显示化瘀降浊汤能够抑制TGF-β诱导的HK-2细胞浸润能力；化瘀降浊汤能够抑制TGF-β诱导的HK-2细胞发生EMT后α-SMA、Snail、FSP-1蛋白的表达,增加E-cadherin蛋白的表达；化瘀降浊汤能增加TGF-β诱导的HK-2细胞TGF-β/Smad信号通路中E-cadherin、 Smad2、Smad7蛋白及基因表达,减少α-SMA、Smad3、Snail蛋白以及基因表达,随着时间改变有差异。表明化瘀降浊汤可能是通过调节HK-2细胞中的由TGF-β/Smad信号介导的EMT达到抑制甚至逆转肾小管上皮细胞转分化。因此化瘀降浊汤保护肾功能的机制可能是通过调控上述途径实现。