【摘 要】
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目的:观察WWP2基因在急性淋巴细胞白血病（Acute Lymphoblastic Leukemia,ALL）患者中表达程度、与临床特征的相关性以及化疗药物多柔比星（dox）可能对该基因表达的影响,在ALL细胞系Jurkat中敲减和过表达WWP2基因,观察该基因的表达水平对ALL细胞系增殖与凋亡的影响,以及在不同的WWP2表达水平下细胞对DOX药物的敏感性影响。方法:1.选取门诊骨髓穿刺标本,包括
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目的:观察WWP2基因在急性淋巴细胞白血病（Acute Lymphoblastic Leukemia,ALL）患者中表达程度、与临床特征的相关性以及化疗药物多柔比星（dox）可能对该基因表达的影响,在ALL细胞系Jurkat中敲减和过表达WWP2基因,观察该基因的表达水平对ALL细胞系增殖与凋亡的影响,以及在不同的WWP2表达水平下细胞对DOX药物的敏感性影响。方法:1.选取门诊骨髓穿刺标本,包括急性淋巴细胞白血病（ALL）初治40例、完全缓解（CR）40例,以及正常对照组22例,正常对照组主要为除外恶性肿瘤的单纯贫血患者及移植供者。通过RT-PCR方法检测WWP2的m RNA表达水平;2.收集40例初治ALL患者临床信息,包括患者性别、年龄、FAB分型、TB分型、骨髓幼稚细胞比例、免疫分型、融合基因、染色体核型、外周血白细胞数、血红蛋白及血小板计数等,通过统计分析探讨WWP2基因与这些临床特征间可能存在的关系;3.选取ALL细胞系Jurkat分为两组,分别向其中转染sh RNA使WWP2基因敲减,转染WWP2质粒使该基因过表达,应用CCK-8实验,向两组细胞中分别加入0.05、0.1、0.2、0.4umol多柔比星（doxorubicin,dox）药物,观察不同浓度dox对转染后细胞增殖活性的影响,当dox浓度为0.2umol时细胞增殖活性为50%,因此选择该浓度为最适浓度进行后续实验;4.应用流式细胞术以及ROS细胞荧光染色等实验,研究WWP2基因表达水平对ALL细胞凋亡和活性氧产生的影响,并探讨不同WWP2基因表达水平下,ALL细胞受dox药物作用的敏感性变化。结果:1.WWP2在ALL初治患者骨髓中表达水平明显升高,与CR组和正常对照组相比有明显差异,结果有统计学意义;2.WWP2基因在CR组和正常对照组中表达水平无明显差异,结果无统计学意义;3.初治ALL患者中WWP2表达水平与所收集的临床特征之间无明显联系,未来可扩大样本量进一步研究;4.CCK-8法检测细胞增殖活性结果示,敲减WWP2基因后,ALL细胞增殖活性明显减弱,反之,过表达WWP2基因后,ALL细胞增殖活性明显增强,并且dox药物浓度0.2umol为该实验中最适浓度;5.流式细胞术以及ROS荧光染色结果示,同样加入0.2umoldox后,敲减WWP2基因的ALL细胞凋亡率明显升高,产生活性氧物质明显增多,而过表达WWP2基因后细胞凋亡率明显下降,产生活性氧物质明显减少;6.敲减了WWP2基因的Jurkat细胞对dox药物更加敏感,而过表达该基因的Jurkat细胞对dox敏感性明显降低。结论:首先,我们首次发现与CR和正常对照组相比,WWP2基因在ALL初治患者中表达水平明显升高,说明WWP2可能在ALL中充当促癌基因的作用。而WWP2表达水平与患者性别、年龄、FAB分型、TB分型、骨髓幼稚细胞比例、免疫分型、融合基因、染色体核型、以及外周血细胞计数等方面均无明显相关性,该结果可能与样本例数少有关。其次,敲减WWP2基因后细胞的增殖活性明显降低,细胞凋亡总数明显增多,产生活性氧明显增多,相反,过表达WWP2基因后细胞增殖活性明显增强,细胞凋亡总数明显减少,产生活性氧明显减少,我们还发现敲减WWP2基因后Jurkat细胞对dox的敏感性增强,而过表达该基因后Jurkat细胞对dox的敏感性明显降低。以上发现对于ALL患者的治疗及预后有着重要意义。
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