肠泰抑制人结直肠癌裸鼠移植瘤生长的实验研究

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目的:肠泰是江苏省中西医结合医院治疗结直肠癌的经验方。本文通过3PLC对肠泰进行质量控制;建立异位移植瘤动物模型,研究肠泰对人结直肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤的抑制作用并探索其机制。方法:1)采用HPLC方法对肠泰进行质量控制。2)采用异位移植瘤动物模型,研究肠泰对人结直肠癌HT-29细胞裸鼠体内异位移植瘤生长的影响,检测经不同浓度的肠泰作用后裸鼠体内肿瘤的体积大小及生长情况;采用一步法TUNEL检测荷瘤小鼠不同浓度肠泰作用下肿瘤组织凋亡水平。3)提取人结直肠癌HT-29细胞荷瘤小鼠肿瘤蛋白,采用Western-Blot技术,检测肿瘤细胞中Cleaved Caspase-9、Cleaved Caspase-3、PARP、Cleaved PARP、 Bcl-XL、Bax、LC3 Ⅰ、LC3 Ⅱ的蛋白表达水平,评估肿瘤细胞凋亡、自噬情况。结果:1)采用外标一点法,分析出肠泰中人参皂苷Rg1、苦参碱、人参皂苷Rb1、黄芪甲苷、阿魏酸和毛蕊异黄酮苷的含量分别为0.273、0.457、0.492、0.791、0.008、0.166mg/g生药量。2)肠泰能够显著抑制裸鼠异位移植瘤的生长,且随药物浓度增高抑瘤率明显增高;TUNEL检测随药物浓度增高,移植瘤肿瘤细胞凋亡程度增高。3)肠泰能够激活Cleaved Caspase-9、Cleaved Caspase-3和PARP,增加促凋亡因子Bax的表达,抑制抗凋亡因子Bcl-XL的表达;同时可增加自噬相关蛋白LC3Ⅱ的表达,并呈浓度依赖性。结论:1)可采用HPLC法对肠泰进行质量控制,质控成分为人参皂苷Rg1、苦参碱、人参皂苷Rb1、黄芪甲苷、阿魏酸和毛蕊异黄酮苷,其含量分别为0.273、0.457、0.492、0.791、0.008、0.166 mg/g生药量;2)肠泰能抑制人结直肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤的生长,促进移植瘤肿瘤细胞凋亡;3)肠泰通过诱导HT29移植瘤细胞发生自噬和凋亡来抑制肿瘤细胞的增殖。
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