益生菌是一种通过摄取足够的量,对宿主的身体健康能发挥有益作用的活的微生物,具有维持宿主肠道菌群平衡,调节机体免疫应答,促进营养物质的消化和吸收等作用。因此益生菌在人医临床、畜禽、水产养殖和宠物上得到广泛研究和不同程度的应用。目前,乳酸杆菌和芽孢杆菌是动物保健及疾病防控中研究和应用较广泛的两大类益生菌。犬腹泻是犬经常出现的一种肠道疾病症状,幼犬最常见,发病率约为30%。犬腹泻通常会导致犬营养不良、精神沉郁、腹痛、严重时可引起胃肠炎、败血症、甚至死亡。经证实,肠道菌群紊乱极易造成腹泻,该病症在临床中通常使用抗生素进行治疗,抗生素的使用加快了肠道菌群的失衡,加剧了细菌耐药性的出现。因此,拥有靶向疾病防控能力的益生菌成为国内外学者的研究热点。本试验使用选择性培养基从健康幼犬粪样中分离筛选出抑菌活性好、抗逆能力强的乳酸杆菌与芽孢杆菌菌株。然后,根据筛选结果选取2株不同类型的分离株(RW1与YW1)进行犬体内实验,初步探索其对试验动物贵宾犬番泻叶诱导的腹泻是否具备调节作用。首先利用乳酸杆菌兼性厌氧等特点,使用MRS培养基厌氧培养并分离乳酸杆菌,从形态学、生理生化特性及16S rRNA基因序列分析进行菌种鉴定,确定分离到一株犬源植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),命名为RW1。利用芽孢杆菌的耐热特点,使用营养琼脂培养基分离并筛选出革兰氏阳性,类似芽孢杆菌菌株,鉴定之后确认分离到一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),命名为YW1。之后,对分离到的2株菌株分别进行了耐酸、耐胆盐特性、生长特性、体外抑菌效果以及药物敏感性等部分生物学特性分析。结果显示乳酸杆菌RW1和芽孢杆菌YW1能够较好的抵御酸性环境和胆盐。牛津杯法测定体外抑菌活力结果显示这两株分离菌株对常见致病菌具备不同程度的拮抗能力,药敏实验结果显示这两株分离菌株对绝大多数抗生素敏感,对氨曲南和呋喃唑酮显示不同程度的耐药性。本研究通过真空冷冻干燥的方式将菌株RW1和YW1按照1:1的比例混合制备成菌含量为5×10~9 CFU/g的二联菌粉。按照1 g/kg剂量给贵宾犬口服该二联菌粉,连续给予14 d,之后按照2mL/kg剂量给贵宾口服生药浓度为1 g/mL的番泻叶,持续灌服3 d,期间持续给予二联菌粉;结果显示口服二联菌粉组临床腹泻程度明显减轻。三种肠道菌群定量结果显示口服二联菌粉的贵宾犬相比阳性对照组乳酸杆菌数量有增加的趋势,致病菌大肠杆菌数量明显下降,肠球菌数量有一定量的减少。结果表明,RW1+YW1二联菌粉能够一定程度调节肠道菌群,改善犬腹泻程度。