狂犬病是一种古老的人畜共患疾病,该病是由弹状病毒科狂犬病毒属的狂犬病毒(Rabies virus,RABV)引起的,在世界各地均有分布,是一个重要的公共卫生问题。RABV是一种负链RNA嗜神经病毒,经感染动物咬伤感染神经,最后在中枢神经系统(CNS)中传播,从而导致严重的神经系统症状,病死率高达100%。尽管有预防的疫苗,但仍然缺乏有效的治疗方法。因此,迫切需要对RABV发病机制有更深入的了解,寻找新的分子靶点,为人类和动物建立一种安全有效的治疗方法。Staufen1(STAU1)是一种双链RNA(dsRNA)结合蛋白,存在保守的氨基酸序列,折叠成双链RNA结合域(RBDs)以及退化的RBDs,这些RBDs参与蛋白质-蛋白质或蛋白质-RNA的相互作用。它参与许多的RNA调控,如mRNA的转运、STAU1介导的mRNA的衰变和mRNA翻译的调控。STAU1不仅参与细胞的各种生物过程,也在许多RNA病毒生命周期的调控中发挥了重要作用,包括HIV、HCV、埃博拉病毒(EBOV)、流感病毒等。STAU1与许多不同的RNA靶标相关联,其中一些靶标已在实验中被识别出来,但仍然有许多是未知的。本课题研究了STAU1在RABV感染中的功能作用,主要研究内容与结果如下:第一部分:制备抗RABV单克隆抗体。将灭活的HEP-Flury病毒液作为抗原免疫小鼠,通过杂交瘤细胞制备技术进行细胞融合。使用细胞免疫荧光、Western blot检测、酶联免疫吸附测定、免疫共沉淀等方法对单克隆细胞进行筛选与鉴定。最终获得3株抗RABV单克隆抗体,其中有一株抗体识别RABV核蛋白、两株抗体识别RABV磷蛋白,这为后续免疫检测实验提供了必要的抗体工具。第二部分:研究STAU1在RABV复制中的作用。一方面,构建STAU1过表达真核载体,利用阳离子聚合物转染质粒使细胞的STAU1表达上调,感染RABV,检测RABV的复制情况;另一方面,使用慢病毒介导的RNA干扰技术建立稳定表达小干扰RNA的STAU1下调细胞系,将细胞系感染RABV后检测RABV的复制水平变化。通过细胞免疫荧光、Western blot、RT-qPCR检测,证实宿主STAU1的下调能够促进病毒的复制。第三部分:初步探究STAU1在RABV感染宿主细胞中的作用机制。通过激光共聚焦技术分析宿主STAU1蛋白在RABV感染前后的亚细胞定位变化,并利用RTqPCR技术分析宿主STAU1蛋白在RABV感染前后转录本的变化。结果发现STAU1在感染细胞中向狂犬病毒转录与复制的重要场所——内氏小体中募集,并且STAU1的下调表达促进病毒的增殖,揭示宿主STAU1可能通过直接或间接与病毒RNA相互作用参与了RABV复制的调控或参与抑制病毒复制。进一步利用生物信息分析,提出了RABV感染期间,STAU1结合病毒mRNA调控病毒复制的模型。本研究利用抗原成功制备了抗RABV单克隆抗体,为免疫诊断提供了重要的检测工具。以自制抗体为工具,初步探究了STAU1在RABV感染过程中的功能。这对于了解RABV病毒致病性关键因子、寻找新的RABV治疗靶标具有重要价值。