基于氧化应激及炎症反应探讨尺泽穴位注射NS对COPD大鼠的作用机制

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目的:观察尺泽穴位注射生理盐水(normal saline,NS)对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)模型大鼠的肺组织形态学、肺功能的改善作用,从炎症反应、氧化应激的角度分析其作用机理;从Nrf2/ARE通路探讨其可能的作用机制。为临床针灸治疗COPD提供一定的科学依据。方法:1.分组与造模:将24只SD大鼠随机分为正常对照组(正常组,n=8)和模型实验组(n=16),适应性饲养1周后,开始对模型实验组进行造模(采用烟熏+脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)气道滴注),共11周。于第8周开始,将模型实验组分为模型对照组(模型组,n=8)、尺泽干预组(尺泽组,n=8),并继续造模;2.干预:于第8周分组结束后立即进行干预:尺泽组于每日造模后取单侧尺泽穴注射NS0.1 ml,直刺0.5 mm,1次/日,左右轮流,连续干预4周。模型组每日同等造模同时固定抓取,不干预;3.指标观察:实验期间,大鼠每周称体重并记录,观察一般情况。干预结束后,大鼠禁食18h,麻醉,采用四道生理记录仪检测肺通气功能。剖腹,腹主动脉采血5 ml,余血尽量放尽,全血离心,取血清。打开胸腔,观察气管、肺组织大体外观,取下右肺固定处组织块冰上匀浆,测血清、肺组织超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA),ELISA法测血清、肺组织IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)的含量。取下右肺叶固定处组织固定于4%多聚甲醛中,包埋、切片、HE染色,行病理形态学观察。另取左肺固定处黄豆大小肺组织2块,液氮转-80℃冻存,测肺组织Nrf2、HO-1、GSTm的m RNA和蛋白的表达。结果:1.一般情况:与正常组比,模型组大鼠体重下降(P﹤0.05),毛色发黄暗淡;尺泽穴位注射NS干预后,体重明显提高(P﹤0.05);2.肺功能:与正常组相比,模型组大鼠肺通气功能(每分通气量)均下降(P﹤0.05),肺弹性阻力有下降趋势;尺泽穴位注射NS干预后,肺通气功能(每分通气量、肺弹性阻力)明显提高(P均﹤0.05);3.肺组织形态学:与正常组相比,模型组肺组织外观、气管呈肺气肿改变及炎性细胞浸润,尺泽组的肺、气管组织外观、病理形态明显改善;4.炎症、氧化应激因子:与正常组相比,模型组血清和肺组织的IL-6、IL-8、TNF-α含量均明显升高(P均﹤0.01)MDA的含量有升高的趋势,血清SOD活力下降(P﹤0.05),肺组织的SOD活力有下降趋势;尺泽穴位注射NS干预后,血清的IL-6、IL-8、TNF-α的含量有下降(P均﹤0.01),肺组织的IL-8、TNF-α的含量下降(P均﹤0.01),肺组织的MDA的含量下降(P﹤0.05),血清MDA含量有下降趋势,肺组织IL-6有下降趋势,血清和肺组织的SOD活力上升(P均﹤0.05);5.Nrf2、HO-1、GSTm基因、蛋白的表达:与模型组比,尺泽组Nrf2 m RNA表达明显上升(P﹤0.05),HO-1蛋白表达明显下降(P﹤0.05)明显,GSTm的m RNA、蛋白均呈上升趋势。结论:1.尺泽穴位注射对COPD模型大鼠具有一定的防治作用。2.尺泽穴位注射防治COPD的作用可能与抗氧化应激、抗炎有关。3.尺泽穴位注射防治COPD所发挥的抗炎、抗氧化作用,与调节Nrf2/ARE通路中的Nrf2基因及HO-1蛋白有关。
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