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内生菌是一类重要的微生物资源,内生菌的存在对植物的生长发育和产量、品质均有明显的影响，内生菌的研究自Vogl在1898年从黑麦草种子内分离出第一株内生真菌，此后植物内生菌作为一种新的微生物资源受到了广泛的关注。类芽孢杆菌是从芽孢杆菌分出的一个新属，目前已有22种。本实验室由刺槐豆中分离出一株具有β-甘露聚糖酶活性的内生菌，本实验室由刺槐豆中分离出一株具有β-甘露聚糖酶活性的内生菌，经初步鉴定为类芽孢杆菌属潜在的一个新种，命名为Paenibacillus sp CH-3。本研究将从诱变选育、产酶条件优化、酶的纯化、酶学特性研究及发酵罐放大这几方面对Paenibacillussp CH-3进行研究。采用紫外诱变，硫酸二乙酯诱变，紫外线-光复活诱变、亚硝酸盐诱变、紫外-亚硝酸盐复合诱变、及紫外-硫酸二乙酯-亚硝酸盐三重复合诱变，对该菌株进行诱变选育，研究发现其最佳诱变方法是先用紫外20W诱变80s，再用1%的硫酸二乙酯处理20min，初筛、复筛筛选出的具有高产酶活性的菌株，对其进行活化培养后用亚硝酸盐诱变处理15min，最终其发酵产酶酶活达可达近150U/mL，较出发菌株产酶酶活提高了200%，其遗传稳定性研究发现此菌株遗传1-5代不太稳定，6代以后其相对酶活趋于稳定，约为出发菌株的2.55倍，并将该菌株命名为Paenibacillus sp CH3-5。通过对Paenibacillus sp CH3-5的产酶培养基和发酵条件优化，确定最佳产酶培养基为：魔芋粉3%，酵母膏0.1%，磷酸氢二钾0.2%，硫酸镁0.3%，氯化钠0.1%，磷酸氢二铵0.5%，CaCl22mmol/L，pH6.5，121℃灭菌20min，最佳发酵条件为接种量2%，37℃200r/min培养78h后测酶活，此时测得酶活最高为233.5U/mL。采用硫酸铵盐析、乙醇沉淀、丙酮沉淀和双水相处理对Paenibacillus sp CH3-5产的β-甘露聚糖酶进行纯化研究，PEG/（NH4）2SO4萃取在最优体系为PEG20%（m/m），（NH4）2SO418%（m/m），NaCl1%（m/m），酶液30%，水30%时，酶萃取率高达97.22%，其纯化倍数为2.59倍，酶收率最高约为47%；硫酸铵盐析酶收率为16.6%，纯化倍数为1.89倍；乙醇沉淀酶收率最高为14.8%，纯化倍数为0.108倍；丙酮沉淀酶收率最高为23.4%，纯化倍数为0.038倍。对Paenibacillus sp CH3-5产β-甘露聚糖酶进行酶学特性分析，该酶最适反应温度和最适反应pH分别为40℃和7.0，在温度为30-45℃、pH6.0-7.5之间时酶活力较为稳定。发酵罐放大研究发现，42h时其酶活力最高为186.28U/mL，补料后酶活力有一定上升。Paenibacillus sp CH3-5所产的β-甘露聚糖酶酶活范围与动物体内环境相似，因此此酶可以广泛的应用在食品、饲料、保健品等行业。