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胃癌是消化道常见的恶性肿瘤之一,在我国其发病率和死亡率位居各类肿瘤的首位。正常胃黏膜上皮细胞的增殖和凋亡保持动态平衡,这主要依赖于癌基因、抑癌基因及许多细胞因子等的调控作用。在胃癌发生的多因素、多阶段、多步骤进行性发展的过程中,癌基因的激活和抑癌基因的失活通常被认为是肿瘤形成和发展的基础。Cx43是细胞间的信号传导的关键,而Smad4是细胞内信号传导通路TGF-β1的关键组件,它可能受细胞间的信号传导的影响,从而影响PCNA,三者之间在胃癌发生过程中可能存在着相关关系,关于三者之间相关关系的研究目前国内外尚未见报道。本实验通过比较Cx43、Smad4和PCNA在正常胃组织及胃癌组织中的表达情况来分析三者与患者年龄、性别及胃癌临床病理学指标(分化程度、淋巴结转移、浸润深度、TNM分期)的关系及其相关关系,进一步阐明胃癌的发病机理,也为治疗胃癌开辟一条新途径。第一部分Cx43、Smad4和PCNA的表达与胃癌关系的研究目的通过免疫组织化学法、Western blotting技术及RT-PCR方法(反转录聚合酶链式反应)检测Cx43、Smad4和PCNA蛋白及mRNA在正常胃组织和胃癌组织中的变化,揭示其与胃癌发生、发展的关系。方法收集承德医学院附属医院2011年8月至2012年10月手术切除标本,经病理证实为胃癌组织标本60例,患者术前均未接受放疗和化疗,正常胃组织(距离肿瘤10cm以外视为正常胃组织作为对照)25例,采用免疫组织化学法及Western blotting技术检测Cx43、Smad4和PCNA蛋白在正常胃组织及胃癌组织中的表达情况;利用RT-PCR技术检测在正常胃组织与胃癌组织中Cx43、Smad4和PCNAmRNA表达水平,并结合临床病理学资料对实验数据进行统计学分析。结果1.免疫组织化学结果1.1Cx43、Smad4和PCNA蛋白在不同组织中的表达1.1.1在正常胃组织中Cx43和Smad4蛋白的阳性表达高于胃癌组织中的表达(P<0.05),PCNA蛋白在胃癌组织中的阳性表达高于在正常胃组织中的表达(P<0.05)。1.2Cx43、Smad4和PCNA蛋白在不同年龄和性别组中的表达1.2.1Cx43、Smad4和PCNA蛋白在男性和女性中及>59岁和≤59岁组中的表达统计学均无意义(P>0.05)。1.3Cx43、Smad4和PCNA蛋白在胃癌不同临床病理特征中的表达1.3.1胃癌组织中高中分化者Cx43和Smad4蛋白的阳性表达高于低分化者表达(P<0.05)胃癌组织中高中分化者PCNA蛋白的阳性表达低于低分化者的表达(P<0.05)。1.3.2胃癌组织中无淋巴结转移者Cx43和Smad4蛋白的阳性表达高于有淋巴结转移者的表达(P<0.05),胃癌组织中无淋巴结转移者PCNA蛋白的阳性表达低于有淋巴结转移者的表达(P<0.05)。1.3.3胃癌组织中TNM分期Ⅰ+Ⅱ期Cx43和Smad4蛋白阳性表达高于Ⅲ+Ⅳ期的表达(P<0.05),胃癌组织中TNM分期Ⅰ+Ⅱ期PCNA蛋白的阳性表达低于Ⅲ+Ⅳ期的表达(P<0.05)。1.3.4胃癌组织中浸润深度未侵及浆膜层Cx43和Smad4蛋白阳性表达高于侵及浆膜层中的表达(P<0.05),胃癌组织中浸润深度未侵及浆膜层PCNA蛋白的阳性表达低于侵及浆膜层中的表达(P<0.05)。2. Western blotting检测结果2.1Cx43、Smad4和PCNA蛋白在不同组织中的表达2.1.1在正常胃组织中Cx43和Smad4蛋白的表达量高于胃癌组织中的表达(P<0.05),PCNA蛋白在胃癌组织中的表达量高于在正常胃组织中的表达(P<0.05)。2.2Cx43、Smad4和PCNA蛋白量在不同年龄和性别组中的表达2.2.1Cx43、Smad4和PCNA蛋白量在男性和女性中及>59岁和≤59岁组中的表达统计学均无意义(P>0.05)。2.3Cx43、Smad4和PCNA蛋白在胃癌不同临床病理特征中的表达2.3.1在胃癌组织中高中分化者Cx43和Smad4蛋白表达量高于低分化者(P<0.05),胃癌组织中高中分化者PCNA蛋白表达量低于低分化者的表达量(P<0.05)。2.3.2胃癌组织中无淋巴结转移者Cx43和Smad4蛋白的表达量高于有淋巴结转移者的表达(P<0.05),胃癌组织中无淋巴结转移者PCNA蛋白表达量低于有淋巴结转移者的表达量(P<0.05)。2.3.3胃癌组织中TNM分期Ⅰ+ⅡCx43和Smad4蛋白表达量高于Ⅲ+Ⅳ期的表达(P<0.05),胃癌组织中TNM分期Ⅰ+ⅡPCNA蛋白表达量低于Ⅲ+Ⅳ期的表达量(P<0.05)。2.3.4胃癌组织中浸润深度未侵及浆膜层Cx43和Smad4蛋白表达量高于侵及浆膜层中的表达量(P<0.05),胃癌组织中浸润深度未侵及浆膜层PCNA蛋白表达量低于侵及浆膜层中的表达量(P<0.05)。3. RT-PCR结果3.1Cx43mRNA、Smad4mRNA和PCNA mRNA在不同组织中的表达3.1.1Cx43mRNA和Smad4mRNA在胃癌组织中的表达低于在正常胃组织中的表达(P<0.05),PCNAmRNA在胃癌组织中的表达高于在正常胃组织中的表达(P<0.05)。3.2Cx43mRNA、Smad4mRNA和PCNA mRNA在不同年龄和性别组中的表达3.2.1Cx43mRNA、Smad4mRNA和PCNA mRNA在男性和女性中及>59岁和≤59岁组中的表达统计学均无意义(P>0.05)。3.3Cx43mRNA、Smad4mRNA和PCNA mRNA在胃癌不同临床病理特征中的表达3.3.1胃癌组织中高中分化者Cx43mRNA和Smad4mRNA的表达高于低分化者的表达(P<0.05),胃癌组织中高中分化者PCNA mRNA的表达低于低分化者的表达(P<0.05)。3.3.2胃癌组织中无淋巴结转移者Cx43mRNA和Smad4mRNA的表达高于有淋巴结转移者的表达(P<0.05),胃癌组织中无淋巴结转移者PCNA mRNA的表达低于有淋巴结转移者的表达(P<0.05)。3.3.3胃癌组织中TNM分期Ⅰ+ⅡCx43mRNA和Smad4mRNA的表达高于Ⅲ+Ⅳ期的表达(P<0.05),胃癌组织中TNM分期Ⅰ+Ⅱ PCNAmRNA表达低于Ⅲ+Ⅳ期的表达(P<0.05)。3.3.4胃癌组织中浸润深度未侵及浆膜层Cx43mRNA和Smad4mRNA的表达高于侵及浆膜层中的表达(P<0.05),胃癌组织中浸润深度未侵及浆膜层PCNAmRNA的表达低于侵及浆膜层中的表达(P<0.05)。结论:1.免疫组织化学方法Cx43、Smad4及PCNA的阳性信号在正常胃组织和胃癌组织中的表达统计学有显著差异,且与胃癌的分化程度、有无淋巴结转移、TNM分期和浸润深度有关,与年龄和性别无关。2. Western blotting技术中Cx43、Smad4及PCNA的蛋白表达量在正常胃组织和胃癌组织中的表达统计学差异有显著性,且与胃癌的分化程度、有无淋巴结转移、TNM分期和浸润深度有关,在年龄和性别组中统计学无显著性差异。3. RT-PCR方法中Cx43mRNA、Smad4mRNA和PCNA mRNA表达在正常胃组织和胃癌组织中的表达统计学有显著差异,且与胃癌的分化程度、有无淋巴结转移、TNM分期和浸润深度有关,与年龄和性别无关。第二部分Cx43、Smad4及PCNA在胃癌中相关关系的研究目的:通过对Cx43、Smad4及PCNA实验数据的分析研究三者在胃癌中的相关关系方法:通过统计软件分析Cx43、Smad4及PCNA的实验数据结果1.免疫组化中Cx43与Smad4蛋白的相关系数:r=0.53(P<0.01);Cx43与PCNA蛋白的相关系数:r=-0.55(P<0.01);Smad4与PCNA蛋白的相关系数:r=-0.49(P<0.01)2.Western blotting技术中Cx43与Smad4蛋白的相关系数:r=0.88(P<0.01);Cx43与PCNA蛋白的相关系数:r=-0.75(P<0.01);Smad4与PCNA蛋白的相关系数:r=-0.79(P<0.01)3.RT-PCR方法Cx43mRNA与Smad4mRNA的相关系数:r=0.83(P<0.01);Cx43mRNA与PCNA mRNA的相关系数:r=-0.76(P<0.01);Smad4mRNA与PCNA mRNA的相关系数:r=-0.81(P<0.01)结论:在胃癌中Cx43与Smad4蛋白表达具有正相关性,Cx43mRNA与Smad4mRNA表达具有正相关性;Cx43与PCNA蛋白表达具有负相关性,Cx43mRNA与PCNA mRNA表达具有负相关性; Smad4与PCNA蛋白表达具有负相关性,Smad4mRNA与PCNA mRNA表达具有负相关性。