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目的:探讨人粒细胞集落刺激因子(Granulocyte Colony-Stimulating Factor, G-CSF)宫腔灌注对于子宫内膜状况欠佳患者的子宫内膜容受性的影响及作用机制,探讨子宫内膜基底-肌层交界区(Endometrial-myometria interface, EMI)渗出性改变对体外受精-胚胎移植(In Vitro Fertilization and Embryo Transfer, IVF-ET)结局的影响。方法:1.对于2012年8月—2012年12月间于兰州大学第一医院生殖医学专科医院进行体外受精-胚胎移植的60例子宫内膜厚度不足或基底低回声、反复种植失败的患者行G-CSF宫腔灌注的前瞻性研究,选择同期内膜状况相似的患者30例作为对照,比较两组的子宫内膜的厚度、回声、基底回声、血流动力学、血清细胞因子变化等指标;2.对子宫内膜细胞的分离与培养,采用免疫组化的方法,用角蛋白抗体(CK-19)对腺上皮细胞进行鉴定,波形蛋白抗体(Vimentin)对基质细胞进行鉴定,用MTT法检测不同浓度G-CSF作用后24h,48h,72h细胞的增殖情况,基质细胞和腺上皮细胞培养孔中分别加入最佳浓度的G-CSF,48h后,流式细胞仪检测两组细胞G-CSFR的表达,RT-PCR检测整合素β3、LIF的表达。结果:1.与对照组相比,灌注组在早卵泡期、晚卵泡期的子宫内膜厚度增加明显,基底回声优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);围排卵期内膜厚度与对照组相比无统计学差异(P>0.05),基底回声优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);灌注组子宫内膜基底区动脉搏动指数(Pulsation Index, PI)于早卵泡期、晚卵泡期及围排卵期均高于对照组,阻力指数(Resistance Index, RI)于早卵泡期及围排卵期灌注组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);晚卵泡期RI与对照组无统计学差异(P>0.05)。在已行胚胎移植的患者中,灌注组的妊娠率为62.5%(35/56),对照组的妊娠率为33.3%(9/27),差异有统计学意义(P<0.05);灌注组与对照组相比,血清IL-1、VEGF和TNF-α OD值增高,IL-2降低,差异具有统计学意义(P<0.05),IL-8和G-CSF OD值无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。2.使用组织块培养法联合差速离心法可成功分离子宫内膜细胞,腺上皮细胞对CK-19免疫反应呈阳性,基质细胞对Vimentin免疫反应呈阳性,两种细胞胞浆均显示棕黄色。3.子宫内膜基质细胞在G-CSF100pg/ml作用24h时细胞存活率最高,子宫内膜腺上皮细胞在G-CSF500pg/ml作用48h时细胞存活率最高,生长状态最佳。4.基质细胞与腺上皮细胞给药组G-CSFR的表达率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);腺上皮细胞LIF表达高于对照组,基质细胞整合素β3的表达高于对照组。结论:1. G-CSF宫腔灌注可改善子宫内膜的厚度及EMI渗出性改变,对于内膜较薄、EMI渗出性改变及胚胎反复种植失败的患者具有较好的临床治疗效果,提高了妊娠率。2.子宫内膜基质细胞在G-CSF浓度为100pg/ml作用24h时细胞存活率最高;子宫内膜腺上皮细胞在培养48h,G-CSF浓度为500pg/ml时细胞存活率最高,生长状态最佳。3. G-CSF可以激发G-CSFR受体的表达,促进IL-1、VEGF、整合素3β、LIF、TNF-α等细胞因子的表达,降低了IL-2的表达,利于胚胎着床。