氨氮、亚硝态氮的积累和有机物污染是泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)池塘养殖水体恶化,病害频发及品质下降的主要原因。利用水中有益微生物对已污染的养殖水环境进行生物修复是目前研究与开发的热点,而通过筛选获得净水效果和制剂生产性能优良的优势菌株是研发高效微生态制剂的关键。目前水产养殖用益生菌制剂很多,但针对泥鳅使用的益生菌的筛选、生长特性及应用研究则未见报道。本研究从泥鳅养殖池塘水中分离筛选出1株益生枯草芽孢杆菌(NQ1),考察了NQ1的生长特性、培养特性、安全性、水质净化效果以及对泥鳅免疫功能影响,试验结果可为在泥鳅养殖中推广应用提供依据。研究获得的具体结果如下:1.泥鳅养殖水体中益生芽孢杆菌的筛选从泥鳅养殖池塘水样中分离纯化得到4株芽孢杆菌,经过降解氨氮、亚硝态氮能力筛选试验,获得1株优势目的菌株,命名为NQ1。在模拟淡水中,在氨氮、亚硝态氮初始浓度分别为5 mg/L和2 mg/L时,2 d后菌株NQ1对氨氮的降解率为33.5%,对亚硝态氮的降解率为99.2%。根据形态学特征和生理生化特性结果,将其初步鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。经生长特性研究表明,枯草芽孢杆菌NQ1可在培养6 h后进入对数生长期,在培养16 h后即达到稳定生长阶段;同时对温度、盐度、pH都具有较好的适应性。安全性试验证实,试验浓度(最高为1×107cfu/mL)的枯草芽孢杆菌NQ1对泥鳅安全。此外,将1×107cfu/mL的NQ1与1×107 cfu/mL的嗜水气单胞菌混合添加至养殖水体中,以空白组为阴性对照组,以添加1×107cfu/mL嗜水气单胞菌的试验组为阳性对照组,暂养泥鳅14 d,结果显示,NQ1与嗜水气单胞菌混合添加组的泥鳅存活率较阳性对照组高25%。2.枯草芽孢杆菌NQ1的生长特性及培养基的优化以普通牛肉膏蛋白胨培养基作为初始培养基,研究了不同培养时间、初始pH值、温度、盐度(NaCl浓度)、转速、装液量和接种量对芽孢杆菌NQ1生长的影响,结果表明:菌株NQ1最大活菌数的培养条件为发酵时间20 h,初始pH 7.4,温度为28℃,盐度为0.5%(w/v),转速为180 r/min,装液量为80 mL/250 m L,接种量为10%。采用单因子试验和L9(34)正交试验优化了种子培养基的组成,结果表明,实验条件下的最佳种子培养基为:蛋白胨为(2%)(w/v)、葡萄糖为(2%)(w/v)、NaCl为(0.3%)(w/v),三种成份对NQ1菌株产活菌数影响力大小顺序为蛋白胨、NaCl、葡萄糖。以上述最佳种子培养基培养,NQ1菌株产活菌数达10.44×108cfu/mL。3.枯草芽孢杆菌NQ1对泥鳅养殖水质的影响以0、1×105、1×106和1×107cfu/mL的浓度将枯草芽孢杆菌NQ1添加至养殖水体中,考察NQ1对泥鳅水质指标的影响。结果表明,NQ1使用14 d后,1×107cfu/mL浓度组的氨氮降解率(52.67%)、亚硝态氮降解率(50.18%)和硫化物降解率(48%)均为3个试验组中的最高值,而且pH波动最小(7.76~7.65)。由此表明,1×107cfu/mL的枯草芽孢杆菌NQ1对净化泥鳅养殖池塘水质具有明显的作用。4.枯草芽孢杆菌NQ1对泥鳅消化酶活性及非特异性免疫的影响以0(对照)、1×105(低浓度)、1×106(中低浓度)和1×107cfu/mL(高浓度)的剂量将枯草芽孢杆菌NQ1添加至养殖水体中,考察NQ1对泥鳅消化酶活性及非特异性免疫的影响。结果表明:14 d时,与对照组相比,高浓度组和中浓度组可显著提高肠道淀粉酶(AMS)和肠道脂肪酶活性(LPS)(P<0.05),高浓度组好于中浓度组,但差异不显著(P>0.05),低浓度组对泥鳅肠道的AMS与LPS活性无显著影响(P>0.05),表明NQ1菌株对泥鳅肠道消化酶活性具有较好的促进作用。与此同时,与对照组相比,中、高浓度组的红细胞数(RBC)、白细胞数(WBC)、血液白细胞的吞噬百分率(PP)、吞噬指数(PI),肝脏溶菌酶(LSZ)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)活性及总抗氧化能力(T-AOC)均显著高于对照组(P<0.05),对肝脏谷草转氨酶(GOT)和谷丙转氨酶(GPT)活性无显著影响(P>0.05)。从总体上看,高浓度的效果优于中浓度。因此,在水体中添加1×107 cfu/m L的枯草芽孢杆菌NQ1能明显促进养殖泥鳅的消化酶活性和非特异性免疫机能。综上所述,枯草芽孢杆菌NQ1具备作为益生菌开发应用的潜力。