【摘 要】
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NF-κB是机体内一种十分重要的核转录因子,与免疫反应、炎症和急性反应、细胞繁殖和凋亡、发育及肿瘤的发生密切相关,调控许多基因的转录表达。我们实验室通过生物信息检索查找
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NF-κB是机体内一种十分重要的核转录因子,与免疫反应、炎症和急性反应、细胞繁殖和凋亡、发育及肿瘤的发生密切相关,调控许多基因的转录表达。我们实验室通过生物信息检索查找到一个可能与NF-κB相关的新颖分子,并将其暂时命名为LJG。通过检查多种肿瘤细胞(包括U937、Hela、MCF-7等)和小鼠组织(肝、胸腺、脾等)LJG表达,发现LJG在各组织中均有表达,且无明显差异。从K562细胞中克隆得到LJG基因,并构建表达载体。将外源LJG-3HA导入293T细胞中,检查LJG mRNA和蛋白的稳定性,其结果显示LJG基因RNA半衰期约为2h,蛋白半衰期约为2h。此外,实验结果显示,LJG蛋白分子量约为28.7KDa。通过软件对LJG蛋白进行蛋白修饰位点预测,预测结果为LJG蛋白不存在N-糖基化修饰位点,却可能存在13个磷酸化修饰位点,5个泛素化修饰位点和11个乙酰化修饰位点。在293T细胞中可观察到LJG蛋白定位于细胞核且呈点状分布,其N端在细胞核定位中起到十分关键的作用。通过P-Match软件分析,在LJG基因转录起始位点上游3098位存在一个潜在NF-κB结合位点,但在U937细胞中TNFα或LPS诱导激活的NF-κB不调控LJG基因表达。此外还发现TNFα(≤40ng/mL)激活NF-κB不改变LJG蛋白在293T细胞中的定位及表达水平。293T细胞中LJG上调Bfl1/A1基因表达,但并不通过TNF α/NF-κB信号通路。
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