本论文共包括三部分内容： 前言部分首先对激光共聚焦荧光显微镜和落射荧光显微镜及其工作原理进行简要介绍；然后介绍了细胞内的第二信使一钙离子以及与之相关的钙离子通道，着重介绍了受体门控的钙通道、胆碱能受体及其效应机制；最后对乙酰胆碱及其检测方法进行了总结和评述。 第一章采用激光诱导荧光的方法检测钙离子，选择Fluo-3AM为钙离子荧光探针，通过细胞内钙离子的荧光强度变化检测乙酰胆碱的含量。首先，钙离子荧光探针在室温下30 min负载，在细胞内酯酶的作用下脱掉乙酰甲酯变成Fluo-3，Fluo-3与细胞内游离的Ca<2+>结合。用激光共聚焦显微镜连续扫描细胞，获得加乙酰胆碱前后的荧光图像。对图像的分析结果说明乙酰胆碱能引起细胞内的钙离子的浓度升高。用落射荧光显微镜确定检测乙酰胆碱的最佳条件，用EMCCD获得荧光图像，数据结果由MateMorph软件测量分析。浓度为5.0X10<-13>～1.0X10<-11>mol/L时，乙酰胆碱与荧光信号的增加值有较好的线性关系，检测限为3.2×10<-13>mol/L。 第二章采用微流控分析芯片与单细胞分析相结合的方法检测了乙酰胆碱的含量。通过模塑法制作了通道直径为约100μm PDMS微流控芯片，利用微流控芯片单细胞进样。选择Fluo-3 AM为钙离子荧光探针，乙酰胆碱刺激单个细胞。用落射荧光显微镜检测了单个细胞内Ca<2+>的荧光强度变化。当乙酰胆碱浓度为1.0x10<-13>～3.0X10<-11>mol/L时，检测到的荧光信号的增加值与乙酰胆碱的浓度成正比，检测限为1.6×10<-13>mol/L。