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研究目的：约70%的肾透明细胞癌存在VHL等位基因的失活、表达缺失(表现为基因突变、缺失及启动子甲基化等),表明VHL基因突变(VHL-/-)在肾细胞癌的形成过程中具有重要的作用。VHL基因蛋白产物(pVHL)可与HIF结合,使HIF泛素化被蛋白水解酶降解。VHL-/-肾细胞癌细胞系786-O由于VHL的表达缺失而导致细胞内HIF-2a大量累积,后者可进一步诱导百余种缺氧适应基因(HIF-2α下游靶基因)的表达。本研究的目的在于探讨VHL-/-肾细胞癌肿瘤形成过程中HIF-2a下游靶基因的作用,寻找潜在的治疗靶点,为肾细胞癌诊断、治疗及预后提供理论依据。研究方法：1.应用半定量QPCR技术在1nRNA水平验证在786-0细胞(786-O VHL+/+,786-0VHL-/-,786-0HIF2a depleted [VHL-/-HIF566],786-O HIF2a depleted [VHL-/-HIF1631], VHL+/+HIF2a-dPA [active], VHL+/+HIF2a-PA-dTA [inactive])由单一的有活性的HIF-2a诱导表达升高的基因；2.应用RNAi技术,慢病毒介导shRNA沉默特定HIF下游靶基因；3.对稳定转染相应shRNA的细胞进行Western Blot, Real Time RCR或者Elisa验证其是否成功抑制该基因的表达；4.体外增殖实验及裸鼠体内成瘤实验,研究特定HIF2a下游靶基因对VHL-/-肾细胞癌肿瘤形成的作用。结果：1.体内及体外实验证实HIF对VHL-/-的肾细胞癌成瘤十分重要。2.在786-0细胞中,HIF转录活性紧密调控着VEGF, CCND1, EN02, EglN3, ANGPTL4, Glut-1, IGFBP3, HIG2, CA12, MTUS1, ZNF395, CP, MXI-1, ARRDC3, Serpinel, Apol1, DDIT4, DUSP1等基因的表达。3.抑制VEGF, CCND1的表达可以抑制VHL-/-肾细胞癌生长,提示它们是促癌基因；抑制ANGPTL4, EGLN3或EN02的表达并不影响VHL-/-肾细胞癌生长；GLUT1或IGFBP3表达缺失明显促进VHL-/-肾细胞癌生长,提示它们有一定的抑瘤作用。4.抑制IGF1R蛋白表达导致IGFBP3在mRNA和蛋白水平表达的显著增加,并抑制肿瘤生长,提示IGF1R是潜在的肾细胞癌治疗靶点。结论：1.HIF-2α对VHL-/-肾细胞癌成瘤至关重要,但HIF下游靶基因的表达对肾癌细胞生长的作用则可表现为促进、抑制亦或没有影响；通过对HIF-2α下游靶基因的研究可以发现潜在的VHL-/-肾细胞癌治疗靶点或诊断及预后指标。2.沉默IGF1R能够抑制肾细胞癌细胞系786-0成瘤,提示IGF1R是潜在的肾细胞癌治疗靶点,其作用的发挥可能通过上调IGFBP-3而实现,为进一步明确VHL-HIF-HRGs调节肿瘤发生发展的机制提供了新的思路。