自2020年初发现新型冠状病毒（Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-Co V-2）以来,该病毒已在全球蔓延,不仅对世界造成了经济损失,更是严重威胁到人类的生命安全,因此研发针对该病毒的有效药物或疫苗刻不容缓。新型冠状病毒具有较高的传染性和致病性,并且出现了传染性更强的D614G、N501Y和E484K等突变,其传染途径多样、无症状感染者多等众多特点导致该病毒防不胜防。目前该病毒只能在P3实验室进行研究,这限制了科研人员对该病毒的研究,不利于有特异性药物的筛选和疫苗的研发,因此迫切需要一种能够进行安全有效且适合广泛应用的研究模型。SARS-Co V-2假病毒颗粒能够很好的模拟活病毒进入细胞的方式与动态,使其成为了一种非常安全的研究手段,这解决了该病毒的安全问题且能够在低于P3条件以下的实验室进行研究。为便于生物安全二级实验室开展SARS-Co V-2感染的研究,本文构建了SARS-Co V-2假病毒颗粒（SARS-Co V-2 pseudovirus particles,SARS2pp）的生产和感染系统。本文介绍的SARS2pp系统基于携带双报告基因e GFP和Luc2的慢病毒载体,以便于更好地定性观察和定量分析。为了提高假病毒的滴度,进行了以下条件的优化:1)去除Spike蛋白的最后19个氨基酸,用小鼠Igk信号肽序列替换原始信号肽;2)用CMV而非CAG启动子表达Spike蛋白;3)筛选制备SARS2pp的最佳刺突蛋白序列;4)在SARS2pp生产培养基中加入1%的BSA。这些条件的优化大大提高了假病毒的滴度,为病毒感染机制、侵染抑制剂筛选以及疫苗评价中和抗体实验提供了便利。在新型冠状病毒疫苗的研究方面,本研究优化了基于委内瑞拉马脑炎病毒（Venezuelan equine encephalitis virus,VEE）病毒的复制型疫苗载体,并用新冠病毒候选Spike抗原蛋白替换VEE病毒结构蛋白设计成自复制型疫苗。设计的Spike蛋白拥有两处突变:1)C末端19个氨基酸进行了删除从而提高其细胞膜定位水平;2)Furin位点进行了突变从而降低Furin蛋白酶的切割。同时构建了RBD的串联结构RBDRBD进行对比研究。通过对小鼠免疫后取血进行血清中和活性检测,初步结果表明设计的抗原蛋白能够较好的刺激机体产生中和抗体。相较于其他DNA疫苗,本疫苗具有候选抗原表达高,清除较快,免疫剂量少等优点,值得进一步深入研究。