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微生态制剂能够有效解决抗生素的残留、产生耐药菌株以及环境污染等问题。其中丁酸梭菌具有较强的耐胃酸、耐胆盐、耐高温能力,能够有效在肠道发挥作用,在治疗腹泻、肠道炎症等方面疗效良好。但丁酸梭菌的工业化生产具有发酵水平较低和储藏期较短等缺点,这对丁酸梭菌的应用上带来了不小的困难。本课题对丁酸梭菌的益生特性、发酵培养基的优化、5L自控发酵罐的生产工艺以及喷雾干燥工艺等几个方面进行了研究,得到研究结果如下: 对本实验室保藏的2株丁酸梭菌进行了益生特性分析,菌株M1与Q1在生长10-12h后均进入对数生长期,最终pH值均在4.5左右。2个菌株都表现出对链霉素、庆大霉素和卡那霉素有较强的耐受性,而对氨苄青霉素、红霉素耐受性较差。金黄色葡萄球菌与大肠杆菌K88等肠道致病菌的生长能受到菌株M1和Q1的显著抑制。菌株M1比Q1的耐人工胃液能力、耐猪胆盐能力更强。因此,综合分析后选取益生特性更好的菌株M1进行后续的发酵工艺优化与喷雾干燥工艺研究。 在前人研究基础上,通过单因素优化及正交实验得到优化后培养基成份为:葡萄糖3%,酵母浸粉1.5%,胰蛋白2%,牛肉浸粉3%,硫酸铵0.1%,碳酸氢钠0.124%,玉米浆粉0.7%,一水硫酸锰0.05%,七水硫酸镁0.05%,氯化钙0.1%,初始pH7.5。最适培养温度为37℃,接种量为3%。 采用5L自控发酵罐生产工艺研究,对厌氧方式、稳定pH值、中和剂及流加补料等方面进行了相关实验,结果显示利用石蜡油液封厌氧培养,通过10%碳酸氢钠作为中和剂将pH控制在6.5,在第12h流加补料3%的葡萄糖,发酵液菌数可达1.24×109CFU/ml。 丁酸梭菌热激实验表明,种子液在80℃水浴10min后接种,培养获得的离心洗涤芽胞悬液的80℃热处理5min后的存活率为77.6%,比未热激组存活率提高了16.6%。利用离心洗涤芽胞悬液进行喷雾干燥实验,结果显示添加12%的脱脂奶粉作为壁材,2%的蔗糖作为保护剂,在进风温度为180℃时存活率可达40.5%。喷雾干燥得到的菌粉在常温条件下储藏3个月以后存活率仍达到39.1%。