利用SELEX技术筛选高危型HPVL1蛋白适体的研究与探讨

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目的:人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌发生的必要前提。筛查HPV感染是宫颈癌早发现、早预防、早治疗的关键。利用指数富集配体的系统进化(SELEX)技术,筛选出与高危型HPV(HR-HPV) L1蛋白高亲和力、高特异性结合的适体,配合特异性IgY建立酶连接适体混合吸附体系(ELASA),用于快速检测HR-HPV。方法:运用生物信息学分析方法对我国常见HR-HPV(16、18、58、52和31型)L1蛋白的B细胞抗原表位进行综合分析,建立HR-HPV抗原表位肽谱;人工合成抗原表位肽,以此为靶标,利用SELEX技术,从体外合成的全长78nt(其中包含35nt的随机序列)的寡核苷酸文库中筛选出能特异性识别HR-HPVL1蛋白的DNA核酸适体,结合动物免疫获得的特异性IgY建立针对HR-HPV的ELASA体系;用经临床HC-2检测确诊的HR-HPV感染的宫颈分泌物检验该体系检出HR-HPV的特异性和灵敏度。结果:人工合成的2个具有诊断潜能的B细胞抗原表位肽,其纯度大于99%。经过多轮的SELEX筛选,得到18条适体链序列,序列的相似性为69.14%,适体的二级结构以发卡、茎环为主。其中与多肽的结合能力最高的是3、7和12号适体,12号适体的Kd值可低至53.93nmol/L。经动物免疫获得的IgY效价为1:12500~1:62500。适体结合IgY建立的ELASA体系有良好的特异性和灵敏度。结论:本研究利用SELEX技术成功筛选到针对我国常见HR-HPV L1高亲和力、高特异性的ssDNA适体群,结合特异性IgY建立用于快速检测HR-HPV的ELASA体系。
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