论文部分内容阅读
实验一、可复性机械性小肠梗阻模型的建立目的:利用Wistar大鼠建立新型的可复性机械性完全性小肠梗阻的动物模型。方法:选取48只健康Wistar 大鼠,随机平均分为假手术组(Sham)、梗阻1d组(S1)、梗阻2d组(S2)、梗阻3d组(S3)、梗阻2d解除组(J2)、梗阻3d解除组(J3)。采用软聚氯乙烯管制成肠梗阻环并将其包绕住回肠末端以建立机械性小肠梗阻模型,通过再次手术取出肠梗阻环即可解除梗阻。观察动物的一般情况,小肠黏膜的大体形态学以及病理形态学变化。结果:与Sham组相比,S1组出现不完全性肠梗阻的症状及明显的肠黏膜损害;S2组出现完全性肠梗阻的症状及较严重的肠黏膜损害;S3组的梗阻症状及肠黏膜损害进一步加重。梗阻解除后,J2组的肠梗阻症状逐渐消失,至第7d时肠黏膜的大体形态以及病理形态基本恢复至Sham组水平;J3组症状消失缓慢,至第7d时肠黏膜损伤仍存在。结论:利用软聚氯乙烯环可成功建立可复性机械性小肠梗阻模型,解除梗阻的最佳时间为梗阻后48小时。实验二、肠梗阻进展过程中肠道菌群的变化目的:观察低位小肠梗阻进展过程中肠道菌群结构及数量的变化,并分析目标菌群与肠黏膜屏障指标之间的相关性。方法:选取32只健康大鼠,随机平均分为假手术组(Sham)、梗阻1d组(S1)、梗阻2d组(S2)、梗阻3d组(S3)。采用16S rDNA扩增子测序研究梗阻近端肠内容物中肠道细菌的构成及相对丰度。根据菌群测序的结果,再利用qPCR测定总菌以及相关菌属的绝对数量。最后采用RT-PCR法测定肠壁组织中Claudin-1的mRNA相对表达量,ELISA法测定血清中的sIgA的含量,分析肠道菌群与肠黏膜屏障指标之间的相关性。结果:1、肠道菌群的构成结果显示,梗阻后肠道菌群的OTU数量显著高于假手术组(P<0.01)。在门水平上,梗阻24h厚壁菌门相对丰度显著降低(P<0.01),变形菌门、疣微菌门和拟杆菌门相对丰度显著升高(P<0.01),24h～72h厚壁菌门丰度略有回升,变形菌门、疣微菌门逐渐下降,拟杆菌门持续增加。在属水平上,梗阻24h时Romboutsira、Lactobacillus、Turicibacter相对丰度显著减少(P<0.01),Esherichia-Shigella、Akkermansia、Bacteroides 显著增加(P<0.01),24h～72h的丰度变化类似于其所属门类。2、肠道菌群的数量结果显示,梗阻24h后肠道内总菌的绝对数量显著增加(P<0.01),24h～72h数量无明显变化。3、在相关性分析中,Claudin-1和sIgA均与Romboutsia呈正相关,与Escherichia coli、Akkermansia、Bacteroides 呈负相关。结论:1、小肠梗阻发生后肠道微生态出现严重紊乱,肠道菌群数量及种类明显增加,构成发生显著变化;2、疾病的不同时期优势菌群有所不同,梗阻24h内为Escherichia coli、Akkermansia,241h～721h主要为Bacteroides;3、梗阻时肠黏膜屏障损伤可能与Escherichia coli、Akkermansia、Bacteroides有关,Romboutsia在疾病中可能起到保护作用。实验三、复方大承气汤对肠梗阻恢复过程中肠道菌群的影响目的:利用可复性机械性小肠梗阻的动物模型,观察肠梗阻解除后肠道菌群的变化及中药复方大承气汤对其影响。方法:选取32只健康大鼠,随机平均分为假手术组(Sham),梗阻2天模型组(S2),自然恢复3天组(R3),中药干预3天组(T3)。对各组大鼠的肠道菌群结构及数量、肠壁组织Claudin-1相对表达量、血清sIgA含量进行检测及对比分析。结果:1、从菌群结构上分析,梗阻解除后,R3和T3组厚壁菌门相对丰度显著增加(P<0.01),疣微菌门丰度显著降低(P<0.01);2、与R3组相比,T3组的OTU数量及群落构成更接近Sham组。3、从菌群数量上分析,与R3组相比,T3中厚壁菌门的Romboutsia、Turicibacter的数量显著增加(P<0.01),而拟杆菌门的Bacteroides 数量显著降低(P<0.01)。4、中药干预组中sIgA含量上升趋势比自然恢复组快,用药3d后接近Sham组水平。结论:复方大承气汤可有效促进梗阻解除后肠道微生态的稳定以及机体的快速恢复,其作用机制包括:1、降低肠道菌群的多样性,抑制细菌的过度生长繁殖;2、促进Romboutsia、Turicibacter等益生菌的生长,降低Akkermansia、Escherichia-Shigella、Bacteroides等致病菌的数量;3、促进机体sIgA的合成和分泌,提高肠黏膜屏障免疫功能。