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目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白对cGAS信号通路的调控作用及其机制。方法:1.分别用pIFNβ-luc、pRL-PK质粒与pcGAS-Flag、pSTING-HA和pHBx质粒共转染HEK293细胞,转染24小时后收集细胞裂解液,运用多功能酶标分析仪检测荧光素酶活性,分析IFNβ的表达水平及HBX对IFNβ表达水平的影响。2.用pcGAS-Flag、pSTING-HA和pHBX质粒共转染HEK293细胞,分别检测各个时间点IFNβmRNA的表达水平及HBX对IFNβmRNA表达水平的影响。3.运用Western-blot及荧光定量PCR检测HepG2、HepG2.215、L02和SMMC-7721各个肝源细胞株中cGAS和STING的蛋白及mRNA表达水平。4.用pcGAS-Flag、pSTING-HA和pHBX质粒共转染HEK293细胞,提取蛋白并运用Western-blot分析磷酸化及二聚体形态的IRF3的表达水平的变化。5.用pHBX分别与pIRF3-Flag或pSTING-HA质粒共转染HEK293细胞,转染24小时后收集细胞裂解液,运用多功能酶标分析仪检测相对荧光素酶活性,分析pIRF3-Flag和pSTING-HA相应诱导的IFNβ表达水平及HBX对IFNβ表达水平的影响,探究HBX调控cGAS诱导的DNA信号通路的作用位点。6.以SMMC-7721细胞为模型,用pHBX质粒转染SMMC-7721细胞,提取蛋白并运用Western-blot分析HBX对cGAS蛋白表达量的影响;提取RNA并运用荧光定量PCR分析HBX对cGAS mRNA表达量的影响。7.用pHBX质粒转染SMMC-7721细胞,运用免疫共沉淀及荧光共定位分析HBX与cGAS的相互作用。8.利用3MA、Rapamycin处理SMMC-7721细胞或者用pHBX质粒转染SMMC-7721细胞,分别检测cGAS及LC3-II蛋白表达量的变化;在SMMC-7721细胞中共转染pGFP-LC3和pHBX或者用3MA、Rapamycin处理转染了pGFP-LC3质粒的细胞,在荧光显微镜下观察自噬颗粒,计数自噬细胞数,计算自噬发生率。结果:1.HBX负调控由cGAS介导的IFNβ的表达。2.在HepG2、HepG2.215、L02和SMMC-7721几个肝源细胞株中,均有STING的表达,但只有L02和SMMC-7721细胞表达cGAS。3.HBX的抑制作用是通过cGAS-STING-IRF3-IFNβ通路实现,且HBX主要通过作用于STING的上游环节进行调控。4.HBX对cGAS的蛋白表达量和功能均有抑制作用,但对cGAS的mRNA水平无影响。5.HBX与cGAS在细胞内共定位,且两者相互结合。6.HBX通过增强cGAS的自噬促进cGAS的降解,从而负调控cGAS信号通路。结论:HBX负调控cGAS信号通路可能因为两种因素:一方面HBX与cGAS相互结合,竞争抑制DNA与cGAS的结合;另一方面HBX增强cGAS的自噬性降解。