背景胶质瘤是中枢神经系统肿瘤中最为常见的肿瘤,其恶性度高,侵袭性强,复发率高,现有的治疗手段对胶质瘤患者的平均生存期延长不是很理想,因此,我们需要对胶质瘤在分子水平上的发生发展过程进行更深入的研究,寻求更精准的诊断以及更有效的治疗手段。肿瘤微环境对肿瘤的发展具有极为重要的意义,尤其是免疫相关的肿瘤微环境,在胶质瘤的分子靶向治疗、免疫治疗中扮演着尤为重要的角色。细胞焦亡除了是肿瘤细胞自身的一种程序性死亡,同时还对肿瘤微环境产生一定影响,因此对于细胞焦亡的调控对胶质瘤的发展过程也显得尤为重要。剪切因子SRSF6在多种肿瘤中表达异常,经研究发现,在胶质瘤中也不例外,且很有可能参与胶质瘤细胞焦亡的调控,进而对胶质瘤的发生发展产生影响。同时,还发现ZNF263作为SRSF6的转录因子,对其蛋白表达进行转录调控,进而参与到胶质瘤细胞焦亡的调控中。SRSF6所调控的胶质瘤细胞凋亡对肿瘤微环境产生一定影响,其中CD8+T细胞产生并分泌的颗粒酶B--一种重要的执行分子发生明显变化,进一步促进胶质瘤生物行为学上的改变。由此,SRSF6调控胶质瘤焦亡的发生、对肿瘤微环境产生影响进一步促进胶质瘤细胞死亡成为一种可行性研究方案,且国内外相关领域尚无报道此方面的研究。目的本研究利用胶瘤细胞系以及动物胶质瘤模型,来研究ZNF263对SRSF6转录调控、SRSF6对于胶质瘤细胞焦亡的影响以及由此引起的胶质瘤细胞与其肿瘤微环境的相互作用,并探讨其分子机制。方法在本研究中,通过TCGA数据库及GTEx数据库预测SRSF6基因在正常组织及胶质瘤中的表达差异;采用荧光定量PCR、western blot分析SRSF6基因及蛋白在胶质瘤组织及细胞系中的表达差异;通过免疫组化观察各级别胶质瘤中SRSF6的表达差异;收集以往我科收治胶质瘤病患者临床相关信息,通过免疫组化对SRSF6蛋白表达评分与胶质瘤患者临床多因素相关性分析,查看SRSF6与患者生存期关系。构建稳定SRSF6基因干扰胶质瘤细胞系,通过CCK8实验观察干扰SRSF表达后胶质瘤细胞活性变化,通过western blot、Elisa等试验观察在胶质瘤细胞焦亡发生时,焦亡相关重要分子的表达及分泌情况与SRSF6蛋白表达的关系;通过裸鼠皮下成瘤模型观察SRSF6通过调控细胞焦亡对肿瘤发生发展的作用。通过双荧光素酶基因报告实验及染色质免疫共沉淀实验验证ZNF263对SRSF6蛋白表达的转录调控机制,并应用相关实验验证ZNF263通过调控SRSF6参与调控胶质瘤细胞焦亡的发生并对胶质瘤的发展起到促进的作用;构建小鼠颅内原位胶质瘤模型,通过免疫组化观察肿瘤微环境中免疫相关重要分子的变化与SRSF6表达的关系,通过western blot观察小鼠胶质瘤细胞系中焦亡相关分子表达变化;通过流式细胞术观察颗粒酶B对胶质瘤细胞凋亡的影响。应用统计分析软件对相关数据进行统计分析,确定其是否具有统计学意义。结果1、SRSF6基因及蛋白在胶质瘤组织中相对于瘤旁组织呈高表达;SRSF6的表达与胶质瘤组织病理分级呈正相关,即胶质瘤级别越高,SRSF6蛋白表达越高;高表达SRSF6的胶质瘤患者生存期明显较低表达患者降低。2、SRSF6可以抑制胶质瘤细胞的焦亡,在裸鼠皮下肿瘤模型中敲减SRSF6后可明显抑制肿瘤的生长。3、ZNF263可以通过结合SRSF6基因启动子区片段增强SRSF6的转录,进而促进SRSF6蛋白表达;ZNF263可以通过促进SRSF6蛋白表达来抑制胶质瘤细胞焦亡,在裸鼠皮下肿瘤模型中敲减ZNF263后可明显抑制肿瘤的生长。4、在小鼠颅内原位胶质瘤模型中,由SRSF6所调控的细胞焦亡可改变肿瘤微环境相关免疫应答,在敲减SRSF6的小鼠胶质瘤细胞成瘤中,CD8+T细胞增多并增加颗粒酶B的产生;颗粒酶B能够促进人及小鼠胶质瘤细胞凋亡。结论SRSF6在胶质瘤中呈高表达,并与胶质瘤病理分级呈正相关;SRSF6的表达与胶质瘤患者生存期呈负相关,可作为潜在的预后评价标准;在胶质瘤细胞及胶质瘤动物皮下肿瘤模型中,SRSF6可以抑制胶质瘤细胞焦亡的发生,ZNF263可以增强SRSF6蛋白的表达,并抑制焦亡。同时SRSF6能够通过抑制胶质瘤细胞焦亡进而抑制胶质瘤微环境中CD8+T细胞分泌颗粒酶B,降低了由颗粒酶B引起的胶质瘤细胞凋亡,间接促进肿瘤细胞增殖及肿瘤发展。