白斑综合症病毒(WSSV)原位PCR及定量PCR检测技术的建立

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用白斑综合症病毒(WSSV)粗提液注射感染凡纳对是(Penaeus vanmnei),感染后分别在2 hr、4 hr、6 hr、8 hr、10 hr、12 hr、14 hr、16 hr、18 hr、20 hr、24 hr、36 hr、50 hr取样,然后分别对样品进行一步PCR、二步PCR、原位杂交、原位PCR检测及定量PCR检测.结果表明:一步PCR法能检测出WSSV感染12 hr后的样品;二步PCR能检测出感染2 hr以后的样品(五个样品中有一个能检出).由实验结果显示,原位PCR方法的灵敏度比一步PCR和原位杂交高,而比二步PCR方法的灵敏度稍低.用该法对WSSV潜伏感染是样进行检测,结果证明WSSV在凡纳对是中的潜伏感染部位为肌肉及肝胰腺.通过对定量PCR条件优化的研究,建立了定量PCR检测技术.比较了WSSV模板的制备方法,发现快速煮沸法简单、快速、效果好.
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