目的:本实验室在前期研究中通过溶液萃取、硅胶层析、离子交换层析、HPLC分离等技术从大蒜提取液中分离出能与内毒素(LPS)及其活性中心Lipid A特异性结合的拮抗内毒素活性的大蒜水溶性A组分(ASLA)。ASLA与内毒素具有较高的亲合力、具有体外中和内毒素并抑制内毒素诱导的巨噬细胞释放TNF-α、IL-6的作用,并对内毒素攻击动物的具有显著的保护作用。但是,ASLA的制备和进一步分离中存在一些问题:一是ASLA产率不可控:无水乙醇沉淀多糖过程中,目的产物易被溶液中析出的絮状多糖沉淀黏附包裹,对产品的产量造成不可预计的影响,但如果剔除脱糖步骤则会使样品在进行硅胶柱层析时因多糖析出黏附、堵塞硅胶柱而使分离无法进行;二是提取周期长,产量少,不便于大量制备ASLA供完成后期单体制备及药效学与作用机制研究需要。因此,原ASLA提取方法亟待改进。方法:利用聚酰胺柱层析、硅胶柱层析、离子交换-HPLC、生物传感器、反相高效液相色谱(RP-HPLC)等技术,定向分离大蒜中具有较高lipid A结合活性的组分。通过体内外活性评价,确定其拮抗脓毒症的主要有效成分。结果:①利用水提取法、聚酰胺凝胶柱层析、硅胶柱层析、离子交换-HPLC等技术定向分离得到与lipid A有较高结合活性的组分:大蒜2号组分(DS2)。②DS2与Lipid A具有较高的结合活性;对LPS攻击小鼠具有显著的保护效果。③经HPLC分析制备后将DS2进一步分离为4个主要组分,其中组分B在体外具有较强的中和LPS能力,并能显著抑制LPS刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α,是DS2拮抗LPS的主要有效成分。④对B组分更进一步分离,对分离得到的主要组成物质进行生物学活性评价,其中B1物质在体外具有较强的中和LPS的能力。结论:通过改进提取方法,从大蒜水提物中快速、稳定地分离得到具有显著拮抗LPS活性的组分—DS2;DS2组分拮抗LPS的主要有效成分为B组分;其中B组分中的B1物质具有较强的体外中和LPS能力。