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目的: 非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)，是以弥漫性肝细胞肥大、泡性肝脂肪变性为病理特征的一类慢性肝病。顾名思义，NAFLD是指除酒精和其他明确的损伤肝脏的因素之外，所发生的肝脏病变。近年来，NAFLD患者的数量在逐年升高，已严重威胁到人类健康。《中国脂肪肝防治指南（科普版）》(2015版)中显示:截止2015年，中国成年人脂肪肝患病率约为15％(6.3％-27％)。非酒精性脂肪肝与糖尿病、肥胖等代谢综合征密切相关，现已居全球慢性肝病的首位。 生长激素(Growth hormone，GH)是一类由脑垂体所分泌的、由191个氨基酸组成的单肽链，通过与生长激素受体（Growth hormone receptor, GHR）结合发挥作用，是调节机体生长、发育等过程的重要内分泌因子。在肝内，生长激素通过生长激素受体的介导刺激合成胰岛素样生长因子（Insulin-like growth factor-1，IGF-1）。低水平的GH和IGF-1与NAFLD的严重程度相关。在肥胖的啮齿类动物和生长激素缺乏的病人中，给予GH和IGF-1治疗可以减轻脂肪肝的状况。这些证据表明GH在肝脏脂代谢的进程中发挥了关键作用。本文将利用肝脏特异性敲除生长激素受体（liver-specific knockout of growth hormone receptor mice,LiGHRKO mice)8周龄雄性小鼠来讨论GH/IGF-1轴与NAFLD之间的联系。期望寻找到治疗NAFLD的新药物靶点。 方法: 1.利用Cre-Loxp杂交技术，将同为C57BL/6J遗传背景的Alb-cre和GHRfl/fl小鼠杂交，同时具有Alb-cre和GHRfl/fl基因的小鼠为LiGHRKO小鼠。利用PCR扩增技术和琼脂糖凝胶电泳实验对3周龄小鼠进行基因型鉴定。繁育得到8周龄的LiGHRKO雄性小鼠作为实验组，同窝出生的GHRfl/fl小鼠为对照组。 2.利用PCR、qRT-PCR实验分别检测肝脏及其他组织GHR基因的DNA复制和RNA转录水平，进行组织特异性敲除验证。 3.取8周龄LiGHRKO雄鼠和对照组小鼠，每组8-10只，进行体重称量，解剖取材，各器官称重，并对肝脏组织进行拍照。 4.内眦取血后，全血存于1.5 ml EP管，4000 rpm，离心10min，取上清即为血清。进行血清学检测，检测血清中谷丙转氨酶（Alanine transaminase，ALT）、谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase，AST)、高密度脂蛋白（High-density lipoprotein，HDL）、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein，LDL)、极低密度脂蛋白(very low-densitylipoprotein，VLDL)的含量。 5.取8周龄LiGHRKO雄性小鼠和对照组小鼠的肝脏组织，进行RNA提取，反转录得到cDNA，通过qRT-PCR实验进行糖脂代谢相关基因表达检测。 6.取8周龄LiGHRKO雄性小鼠和对照组小鼠的肝脏组织，进行蛋白质提取，通过免疫印迹和免疫组织化学实验检测PI3K/AKT/mTOR/p70S6k1通路的变化情况。 7.利用线粒体活性氧、线粒体膜电位以及线粒体功能相关基因表达检测LiGHRKO小鼠和对照组小鼠的线粒体功能情况。 结果: 1.肝脏特异性敲除生长激素受体后，8周龄LiGHRKO雄性小鼠体重及其他脏器无明显变化，肝脏重量与体积增大，呈非酒精性脂肪肝表型。 2.肝脏特异性敲除生长激素受体后，LiGHRKO雄性小鼠出现糖耐量减退、胰岛素抵抗和糖代谢异常。 3.8周龄LiGHRKO雄性小鼠的脂肪合成显著增加，脂肪分解明显减少。肝脏特异性敲除生长激素受体致使肝脏内脂肪过度沉积。 4.肝脏特异性敲除生长激素受体，可减少p-PI3KTyr607、p-AKTSer273、p-mTORSer2448、p-p70S6K1Ser371的表达水平，抑制PI3K/AKT/mTOR/p70S6k1信号通路的转导。 5.肝脏特异性敲除生长激素受体后，线粒体活性氧升高、膜电位降低、线粒体相关基因表达减少、线粒体结构紊乱。 结论: 本研究结果证明，肝脏组织生长激素受体的缺失致使小鼠出现胰岛素抵抗、血清中VLDL、LDL、AST、ALT的水平升高。同时，肝脏组织生长激素受体的缺失增加了肝脏脂肪摄取和脂肪新生。LiGHRKO小鼠的PI3K/AKT/mTOR/p70S6k1信号通路传导受到抑制。而PI3K/AKT/mTOR/p70S6k1信号通路在肝脏组织中的抑制，会导致糖异生和线粒体的功能异常。我们发现，LiGHRKO小鼠的线粒体活性氧(ROS)升高、膜电位下降(△Ψm)、线粒体结构与活力相关基因表达量减少，致使线粒体结构受损，进而导致线粒体功能紊乱。本实验推断，肝脏中GH/IGF-1轴损伤后抑制PI3K/AKT/mTOR/p70S6k1信号通路的转导，引发肝脏线粒体功能异常，进而导致肝脏脂代谢异常与NAFLD病变的发生。