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双歧杆菌是人体肠道内重要的益生菌,具有调节人体免疫、改善肠道环境、维持肠道平衡、预防衰老和肿瘤等生理学功能,是人体健康重要的评定指标之一,有着预防和治疗疾病作用,因此在食品和药品领域被广泛应用。然而双歧杆菌作为一种严格厌氧菌,在培养方面易受到氧气、pH值等影响,培养困难,不利于双歧杆菌制品的开发与应用。论文的出发菌株为青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis),经物理诱变、化学诱变及耐性驯化试验选育出同时耐氧、耐胆盐及耐酸菌株,并进行高密度培养,微胶囊化,冷冻干燥技术获得易于工业化生产的活菌制剂。(1)以青春双歧杆菌作为原始菌株,对其进行物理及化学诱变,选育获得同时耐氧、耐胆盐及耐酸性菌株。试验发现紫外诱变优于化学诱变,在距离20W紫外灯30cm处照射70s,获得耐pH值4.5,耐胆盐浓度0.03%的诱变菌株青春双歧杆菌W70；再进一步进行驯化试验,最终耐pH值可低至3.0,耐胆盐浓度高达0.2%。(2)以菌体密度为考察指标,通过单因素试验和响应曲面分析对青春双歧杆菌W70进行高密度培养。获得最佳的培养基配方为：大豆蛋白胨30.52g/L、葡萄糖36.33g/L、玉米糖化液0.73mL/L,吐温-801.00mL/L,L-半胱氨酸0.50g/L,混合盐溶液10mL/L；最佳的培养条件为：初始pH值为7.8、接种量为5%(v/v)、培养温度42℃；在最佳的条件下进行培养,培养液中所含的菌体浓度可高达2.41×108cfu/mL。(3)通过单因素和正交试验确定了最佳冻干保护剂的配方：海藻糖浓度为80g/L、甘油浓度为200mL/L、脱脂乳粉浓度为]00g/L和蔗糖浓度为81.30g/L。再添加保护剂后,进行二次包埋,采用挤压法进行微胶囊化,冷冻干燥获得活菌制剂,其活菌数可高达2.21×108cfu/g。(4)最后对青春双歧杆菌W70活菌制剂进行耐胃液、耐胆盐、耐肠液等耐受性试验。试验结果显示,在模拟胃液中处理3h后,菌体的存活率为46.37%;在3.0g/L的胆盐溶液中处理3h,存活率仍达到26.74%；经过肠溶性测定,微胶囊菌剂会在50min之内崩解；完全崩解后,仍有青春双歧杆菌W70存活。