基于适体的癌细胞检测及碳纳米管复合材料生物相容性研究

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准确、灵敏地诊断白血病对于临床医生选择合适的治疗方法至关重要。目前白血病诊断的常规技术往往耗时、成本高、检测仪器昂贵,所以,开发一些检测成本低,使用仪器简单,并能提供灵敏、准确的诊断结果的方法是即时诊断领域的发展目标。适体是一种被视为化学合成抗体的单链DNA/RNA构成的分子探针,在生物医学领域具有广阔的应用潜力。本论文在基于适体的肿瘤细胞检测方面开展了一些研究工作。另外,构建纳米复合材料用于发展骨组织工程意义重大。本论文的主要研究工作如下:1.将对人急性白血病细胞(CCRF-CEM)具有特异性识别能力的巯基修饰适体(sgc8c)自组装到金电极表面,开发了一种简单、方便、低成本、无标记的早期检测白血病细胞的电化学传感器。用循环伏安和电化学阻抗表征了修饰电极,并通过计时库仑分析得到了电极表面的适体密度。所制备的适体传感器经CCRF-CEM细胞孵育后,电极界面上的电子转移电阻(Ret)显著增大;且传感器对CCRF-CEM细胞具有良好的选择性。Ret值和细胞浓度对数值呈线性关系,检测线性范围为1×10~4-1×107 cells/mL,检测限为6×103 cells/mL。2.利用无标记金纳米颗粒(AuNPs)做指示剂,开发了一种可视比色检测肿瘤细胞的方法。该分析主要是基于单链DNA能够展开并暴露出碱基部分,吸附到AuNPs表面,从而使得AuNPs在高盐浓度下保持稳定。当将CCRF-CEM细胞悬浮液和单链寡核苷酸适体sgc8c孵育后,适体可选择性地结合到目标细胞表面,使得离心上清液中DNA的浓度降低,导致AuNPs在高盐浓度下失去稳定并发生团聚,而非目标细胞RAJI和随机序列DNA不会引起AuNPs溶液颜色的变化。该方法在肉眼比色分析和光谱分析方面都具有很好的灵敏度。3.通过溶剂挥发法,将碳纳米管(CNTs)掺杂到壳聚糖-明胶(chitosan–gelatin, CG)复合材料中,显著增强了CG复合材料的机械性能,将扩大其在骨组织工程中的应用前景。用扫描电镜、接触角测试和拉伸测试表征了CG/CNTs材料的表面形貌、亲水性和机械性能。CNTs均匀地分散在CG膜的基质中;与CG膜相比,仅添加0.4% CNTs,纳米复合材料的杨氏模量就增强了180%。利用人成骨细胞MG-63研究了复合材料的生物相容性,显微镜观察、吖啶橙染色和MTT研究结果表明,CG/0.4% CNTs不会影响细胞的贴壁、铺展和增殖。
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