钙结合蛋白S100A9在小鼠铜绿假单胞菌肺炎中的表达及意义

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目的:观察小鼠铜绿假单胞菌肺炎肺组织中钙结合蛋白S100A9mRNA表达,并同时测定对应小鼠血液中S100A9钙结合蛋白含量,观察肺组织的病理改变,探讨钙结合蛋白S100A9在铜绿假单胞菌所致小鼠肺部感染中的地位与作用。方法:小鼠36只,按随机数字表分为空白对照组12只、模型组小鼠24只。通过经环荚膜穿刺注射铜绿假单胞菌菌液建立肺部感染模型。空白对照组(经环荚膜注射等量的2个麦氏单位浓度(6×10~8cfu/ml)0.6ml的铜绿假单胞菌菌液,造模过程中死亡2只)、模型组(经环荚膜注射等量的2个麦氏单位浓度的铜绿假单胞菌菌液0.6ml,造模中死亡5只,分别在在3小时和9小时2个时间点各处死9和10只)。取小鼠右肺下叶HE染色观察肺组织病理,观察空白对照组,3h模型组及9h模型组的病理改变;使用普通PCR检测系统对三组小鼠肺组织中S100A9mRNAPCR反应进程中的产量进行实时监测,最终对实验数据进行分析,从而比较三组小鼠S100A9mRNA表达,并同步采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)法分别测定三组小鼠血液中S100A9以及TNF-a的含量,比较三组小鼠血液中生成S100A9钙结合蛋白的差异及与TNF-a变化的相关系。结果:(1)病理观察:大鼠右下肺肺组织HE染色200倍光镜下病理结果显示,正常对照组(1组)肺泡结构较为均匀与清晰,有少许淋巴细胞与巨噬细胞侵润;模型组(3h组)主要为肺泡炎性改变,肺泡内及周围可见渗出,中性粒细胞和淋巴细胞,巨噬细胞浸润;模型组(9h组)肺泡炎性最严重,肺泡内及周围可见大量渗出,大量中性粒细胞和淋巴细胞,巨噬细胞浸润,病理炎性改变明显重于3h组。(2)普通PCR实验:本实验根据电泳后条带亮度的强弱来判断模板拷贝数的高低,或者是表达量的高低。实验结果得出s100A9mRNA在第3h,9h组中的条带亮度强度明显高于空白组,提示S100A9表达量模型组明显高于对照组,且经统计分析后3h与对照组差异具有统计学意义(p<0.05),与9h模型组比较(P<0.05)差异有意义。(3)S100A9钙结合蛋白ELISA检测:结果显示3h,9h组外周血中S100A9的含量明显高于空白组,且以3h组增高最明显,3h组与空白组比较差异具有统计学意义(p<0.05)与9h组比较(P<0.05)有差异。(4)肿瘤坏死因子TNF-a的ELISA检测结果显示:3h,9h组外周血中TNF-a的含量明显高于空白组,差异具有统计学意义(p<0.05)。(5)通过对S100A9钙结合蛋白与肿瘤坏死因子-a的相关性分析后,得出两者之间的变化趋势存在正相关,3h模型组r=0.77;9h模型组,r=0.653.结论:(1).钙结合蛋白S100A9参与小鼠铜绿假单胞菌肺部炎症反应。(2).钙结合蛋白S100A9在小鼠铜绿假单胞菌肺炎中与经典炎性因子TNF-a存在密切相关。
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