目的:乳腺癌是我国女性发病率最高的癌症,且发病率逐年递增,严重威胁女性身心健康。近几年,关于遗传基因及基因多态性和乳腺癌发病风险的研究与日俱增。研究表明基因多态性是造成癌症个体差异原因之一。基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)是引起基因变异最常见的一种形式,作为基因标志物,它可以帮助研究人员发现基因在癌症的发生发展中的作用,来评估癌症的风险因素。胃蛋白酶原C(PGC)是由胃黏膜主细胞合成并分泌到胃腔。在正常生理条件下,PGC作为成熟分化胃黏膜细胞的终产物,主要在胃中有表达。近年来,越来越多的研究表明PGC和癌症的发生发展有着密切的关系,关于异位PGC表达的研究也逐年增多,特别在激素相关肿瘤,如前列腺癌,乳腺癌,卵巢癌中,其恶性组织表达较正常及良性组织显著增加。编码PGC蛋白的PGC基因位于6号染色体,6p21.3-21.1区,Cai-yun He等人挑选出8个标签SNPs进行研究,结果表明PGC基因SNPs对胃疾病的发生发展起一定作用。目前,关于PGC基因多态性在乳腺癌发生发展过程中的作用尚没有相关研究,因此,本研究拟通过对PGC基因7个tagSNPs进行多态分型检测,同时对乳腺良性肿瘤组织及恶性肿瘤组织进行免疫组化实验及血清ELISA检测实验,在体内研究PGC基因多态性对乳腺癌风险的影响,同时研究PGC基因多态性是否会通过影响PGC蛋白表达进而影响乳腺癌发生发展。在明确易感基因多态和乳腺癌发病风险关系基础之上,进一步在体外验证PGC基因多态与乳腺癌相关分子机制,从而在基因水平为乳腺癌发病的遗传机制提供更多证据。研究方法:根据NCBI dbSNP和HapMap数据库公布的最新数据,采用软件预测方法,选择在中国人群中最小等位基因频率(MAF)>5%的标签SNPs(tagSNPs)进行研究。最后确定PGC rs6912200、PGC rs6458238、PGC rs6941539、PGC rs9471643和PGC rs3789210这5个tagSNPs来探讨其与乳腺癌发病风险、临床生物学行为之间的相关性。应用KASP方法对544例乳腺癌组和536例乳腺非癌对照组进行PGC基因rs6912200、PGC rs6458238、PGC rs6941539、PGC rs9471643和PGC rs3789210五个多态分型检测。采用多因素Logistic回归进行PGC基因多态与乳腺癌发病风险及其相关临床病理参数相关性分析。应用online SHEsis方法进行单体型分析。应用免疫组织化学法检测乳腺癌及乳腺良性对照组PGC蛋白表达情况,比较两组之间PGC蛋白表达差异。之后分析PGC蛋白表达与乳腺癌病理参数之间关联性,最后比较PGC基因tagSNPs不同基因型之间原位PGC蛋白表达差异。应用酶联免疫吸附法检测乳腺癌及乳腺良性对照组血清PGC表达,比较二组之间血清PGC表达差异。之后分析血清PGC蛋白表达与乳腺癌病理参数之间关联性,最后比较PGCtagSNPs不同基因型之间血清PGC蛋白表达差异。应用荧光素酶报告基因系统检测PGC基因rs9471643位点不同基因型报告质粒的荧光素酶活性,比较不同等位基因启动子活性差异。结果:1、对5个PGC基因tagSNPs分型与乳腺癌发病风险相关性分析结果显示,总体人群中,PGC基因rs9471643位点纯合子突变型和隐性模型患乳腺癌风险增加(P均<0.05)。rs3789210位点杂合型携带者可增加乳腺癌患病风险(P=0.045)。根据年龄分层分析时,在≤40岁年龄组中,rs6912200位点纯合子突变型和隐性模型患乳腺癌风险增加(所有P值<0.05)。以BMI分层分析发现,BMI≤24kg/m2组中,rs9471643位点纯合子突变型者患乳腺癌风险增加,在BMI>24kg/m~2组中,rs3789210杂合型和显性模型患乳腺癌风险增加。2、PGC基因SNPs与乳腺癌临床病理参数之间关系结果显示PGC基因rs6912200位点杂合型者,肿瘤体积最大径线≥2cm相对乳腺癌恶性度较低(P=0.047)。PGC基因rs6912200位点突变型T等位基因携带者,HER2表达阳性者乳腺癌恶性度相对较低(P=0.048)。携带PGC基因rs6941539位点突变型者,即TT型,ER阴性与乳腺癌恶性度呈正相关(所有P值<0.05)。PGC基因rs3789210位点隐性模型,其PR阴性与乳腺癌恶性度呈正相关(P=0.045)。rs3789210位点G等位基因携带者,HER2阳性与乳腺癌恶性度呈正相关(所有P值<0.05)。3、按照年龄进行分层结果显示大于40岁人群中,rs6912200位点C等位基因携带者,乳腺癌最大径线≥2cm者相对乳腺癌恶性度较低(所有P值<0.05)。rs6458238位点显性模型淋巴结转移与乳腺癌恶性度呈正相关(P=0.046)。rs6941539位点突变纯合子TT型基因携带者,ER阴性与乳腺癌恶性度呈正相关(所有P值<0.05);其纯合子TT型基因携带者PR阴性与乳腺癌恶性度也呈正相关(所有P值<0.05)。rs3789210位点突变纯合子GG基因携带者,PR阴性与乳腺癌恶性度呈正相关(所有P值<0.05),其G等位基因携带者,HER2阳性及Ki-67高表达与乳腺癌恶性度呈正相关(所有P值<0.05)。在小于40岁人群中,rs6941539位点T等位基因型携带者与乳腺癌组织学类型显著相关(所有P值<0.05)。按照BMI分层分析中,BMI>24 kg/m~2人群中,rs6912200位点C等位基因携带者与乳腺癌淋巴结转移与HER2表达相关(P值<0.05)。rs9471643位点C等位基因携带者与淋巴结转移相关(P值<0.05)。rs3789210位点GG基因型携带者ER、PR阴性与乳腺癌恶性度呈正相关(P值<0.05),其多态显性模型HER2阳性与乳腺癌恶性度呈正相关(P=0.027),其G等位基因携带者Ki-67高表达与乳腺癌恶性度呈正相关(P值<0.05)。4、对研究中涉及到5个多态位点进行单体型分析,结果发现携带C-G-C-C-G(rs6912200-rs6458238-rs6941539-rs9471643-rs3789210)单体型多态可以显著增加乳腺癌发病风险(P=0.002)。5、在原位蛋白表达水平,我们发现乳腺癌组中PGC蛋白表达免疫组化评分明显高于乳腺良性组PGC评分,且有统计学意义。进一步分析PGC蛋白表达情况与乳腺癌的临床病理参数之间关系,结果表明BMI>24kg/m~2组中,PGC蛋白表达与HER2表达存在相关性,在BMI≤24kg/m~2组中,PGC蛋白表达与TNM分期存在相关性。6、在血清蛋白表达水平,我们发现乳腺癌组中血清PGC表达明显高于乳腺良性组血清PGC表达,且有统计学意义。进一步分析了血清PGC表达与乳腺癌的临床病理参数直接的关系,结果表明总体人群中,高组织学分级(III级)乳腺癌血清PGC表达要明显低于低级别乳腺癌(低于II级)(P=0.008),对于ER表达阳性和PR表达阳性的乳腺癌患者,血清PGC表达明显高于二者阴性表达患者(所有P值<0.05)。进一步对年龄分层,分析发现大于40岁组中组血清PGC表达趋势在组织学分级、ER、PR表达中与总体人群趋势一致,且具有统计学意义(所有P值<0.05)。在年龄较小年龄组中,高组织学分级(III级)乳腺癌血清PGC表达要明显低于低级别乳腺癌。在BMI>24kg/m~2组中,PR表达缺失的患者血清PGC表达明显低于PR阳性的患者(P=0.008)。在BMI≤24kg/m~2组中,血清PGC表达趋势在组织学分级、ER、PR表达中与总体人群趋势一致,另外TNM分期较高组血清PGC表达明显高于TNM分期较低组(P=0.005)。7、在乳腺癌组织标本中,PGC基因rs9471643位点GG型PGC蛋白表达水平明显高于GC型或GC+CC型(所有P<0.05),乳腺良性组织标本中,rs3789210位点CC型PGC蛋白表达水平显著高于GG型或CC+GC型(所有P<0.001)。8、总体分析中,我们发现PGC基因rs6458238位点GG型蛋白血清表达水平显著高于GA型或GA+AA型(所有P值<0.05)。按照良恶性组织进一步分析发现,在乳腺良性组中,rs6458238位点基因型PGC蛋白血清表达与总体分析中表达水平趋势一致,即GG型蛋白血清表达水平明显高于GA型或GA+AA型(所有P值<0.05)。9、体外实验中,启动子荧光素酶报告实验结果显示,与rs9471643多态野生型G等位基因相比,其突变型C等位基因荧光素酶活性显著降低(P=0.0089)。结论:1、PGC基因rs9471643和rs3789210位点在整体人群中可增加乳腺癌发病风险。在年龄较小人群中,rs6912200增加乳腺癌发病风险。在BMI≤24kg/m ~2中,rs9471643可增加乳腺癌发病风险;在BMI>24kg/m ~2中,rs3789210可增加乳腺癌发病风险。2、PGC基因rs6912200、rs6941539和rs3789210位点与乳腺癌病理参数存在相关性。年龄分组后,>40岁人群中,rs6912200、rs6458238、rs6941539和rs3789210位点与乳腺癌病理参数存在相关性,≤40岁人群中,rs6941539位点与乳腺癌病理参数存在相关性。在BMI>24 kg/m ~2,rs6912200、rs9471643和rs3789210位点基因模型与乳腺癌病理参数相关,BMI≤24 kg/m ~2中,rs6458238位点和rs6941539位点与乳腺癌病理参数相关。3、PGC基因5个多态C-G-C-C-G(rs6912200-rs6458238-rs6941539-rs9471643-rs3789210)单体型多态可以增加乳腺癌发病风险。4、乳腺癌中PGC原位表达高于乳腺良性对照组。同时PGC蛋白原位表达与乳腺癌HER2状态及TNM分期存在相关性;5、血清PGC表达在乳腺癌组中高于乳腺良性对照组。同时血清PGC表达与乳腺癌组织学分级、ER表达和PR表达及TNM分期相关;6、PGC基因启动子区rs9471643位点可降低启动子活性,下调PGC蛋白原位表达水平,进一步明确rs9471643位点与乳腺癌发病风险之间的可能机制。7、乳腺良性组中rs3789210位点GG基因型携带者,与PGC蛋白原位表达水平降低相关;rs6458238位点A等位基因携带者在总人群和乳腺良性组中,与PGC蛋白原位表达水平降低相关;