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恶性肿瘤是目前危害人类健康最严重疾病之一。近二十年全国性死亡原因调查显示，死亡率上升幅度最大的是肺癌。目前肺癌的治疗一般采用手术、化疗、放疗、免疫治疗等综合措施，其中化疗作为全身性治疗手段，在恶性肿瘤的治疗中具有手术和放疗不能替代的地位。但是肿瘤细胞的耐药性，尤其是肿瘤的多药耐药性（multidrug resistance，MDR）常导致临床化疗失败。肺癌耐药机制复杂，由多基因及多途径参与，包括：①多药耐药基因及P-gp表达增加；②多药耐药相关基因及多药耐药相关蛋白表达增加；③肺耐药相关基因及肺耐药相关蛋白表达增加；④谷胱苷肽及其转移酶表达增加；⑤拓扑异构酶表达下降；⑥肿瘤细胞DNA损伤修复能力及抗调亡能力增强等。因此，若能对肿瘤的耐药性进行预测，可避免使用MDR型药物，实现肿瘤病人的个体化化疗（individualized chemotherapy）,做到有的放矢，提高疗效。国内外已有较多文献涉及肺癌的多药耐药问题，但内容较分散，讨论因素较单一，且存在相互矛盾之处。因此，本课题选择肺癌作为研究对象，旨在对肺癌的多药耐药性有一个较全面的了解，包括：（1）应用MTT法进行肺癌组织体外药物的敏感性测定，筛选对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）药敏实验的条件，选择对肺癌化疗的敏感性药物。（2）了解P-gp、MRP、LRP、GST-π、Topo-II、P53、Bcl-2、rasmRNA及蛋白在肺癌组织中的表达及相互间联系。（3）了解P-gp、MRP、LRP、GST-π、Topo-II、P53、Bcl-2蛋白在肺癌组织中的表达与肺癌细胞体外药敏之间的关系。（4）肺癌组织与外周血单核细胞体外药敏试验相关性研究。1 人体肺癌细胞对化疗药物敏感性的测定1.1非小细胞肺癌药敏实验条件的筛选1.1.1NSCLC药敏实验中药物浓度的筛选。应用MTT法对25例人体NSCLC原代细胞进行8种化疗药物不同浓度对瘤细胞抑制率的测定。体外实验药物浓度（μg/ml）C=50×D／5000×2×103，D为临床每日用药剂量（mg*kg-1*d-1），50为平均成人体重（kg），2为血细胞比积50%的倒数<WP=5>值，乘103后将mg换算成μg。以此浓度为基础值，以10倍比稀释及浓缩各1个等级，作为实验药物的浓度等级。实验分三组①0.1C组；②1C组；③10C组。结果如下：1.1.1.1药物浓度为0.1C时，仅MMC、5-Fu敏感；而药物浓度在1C及10C时，敏感药物分别增至5种至4种，说明提高药物浓度可提高其对瘤细胞的抑制率，但从其排序上看，抑制率大于50%的药物都是MMC、CBDCA、CDDP，其药物种类并无区别。1.1.1.2同一药物不同浓度对肺癌细胞抑制率的比较：1C与0.1C浓度时，除5-Fu有下降趋势外，余各药均有上升趋势，其中CDDP、CBDCA 、MTX具有明显剂量依赖性（P<0.05）； 10C与1C浓度时，ADM、CDDP、VCR、MTX均有上升趋势，而CBDCA、MMC、5-Fu、Vp-16呈下降趋势；5-Fu下降明显（P<0.05）。结果提示：NSCLC细胞MTT法药敏实验的药物浓度应为临床用药量的计算值（1C）。1.1.2 NSCLC药敏实验中药物作用时间的筛选。应用MTT法对25例人体肺癌原代细胞进行8种化疗药物不同作用时间对瘤细胞抑制率的测定。实验药物浓度为计算值（1C），实验分三组①24h组；②48h组；③72h组。结果如下：1.1.2.1作用时间为24小时无敏感药物；作用时间为48小时， CDDP、CBDCA、MMC、5-Fu敏感；作用时间为72小时，CBDCA、CDDP、MMC、5-Fu敏感。1.1.2.2同一药物不同作用时间对肺癌细胞抑制率的比较：48小时与24小时之间比较，各药对肺癌细胞的抑制率均有上升趋势，ADM、CBDCA、MMC、5-FU药物有显著性差异（P<0.05）；72小时与48小时之间比较，ADM、CBDCA、MMC、5-Fu、MTX均有上升趋势，其中ADM有显著性差异（P<0.05）；而CDDP、Vp-16、VCR呈下降趋势；VCR下降明显（P<0.05）。结果提示：NSCLC细胞MTT法药敏实验的药物作用时间以48小时为宜。1.2化疗药物对原代肺癌细胞抑制作用的比较观察8种化疗药物对肺癌原代细胞抑制率的影响。89例患者术前均未<WP=6>接受过药物治疗。实验分组：男性70例，女性19例；非小细胞肺癌（NSCLC）组79例（腺癌26例、鳞癌36例、低分化癌17例），小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)组10例；肿瘤位于左肺上叶26例、左肺下叶15例、右肺上叶24例、右肺中叶9例、右肺下叶15例；TNM分期：Ⅰ期43例、Ⅱ期16例、Ⅲ期28例、Ⅳ期2例。应用MTT法进行8种化疗药物对89例肺癌原代细胞的敏感性测定，实验药物浓度为计算值（1C），药物作用时间48h；流式细胞术（FCM，Flow cytometry）检测肿瘤细胞的增殖指数（PI）、DNA指数（DI）及细胞周期各时相所占的比率与各种化疗药物对肺癌细胞抑制率的关系。结果如下：1.2.1肺癌组织对化疗药物的敏感度比较。各药的敏感度=敏感例数/总例数。NSCLC组：CDDP>CBDCA>MMC>5-Fu>Vp-16>VCR>MTX>ADM；鳞癌组： CDDP> CBDCA>MMC>Vp-16>5-Fu>VCR>MTX>ADM；腺癌组： CDDP>CBDCA>MMC>5-Fu>Vp-16>VCR>MTX>ADM；低分化癌组：CDDP> MMC>CBDCA>5-Fu>MTX>Vp-16>VCR>ADM；SCLC组： Vp-16>CBDCA>CDDP>MMC>5-Fu>MTX>VCR>ADM。SCLC组对Vp-16的敏感度明显高于NSCLC组、腺癌组（P <0.05）；鳞癌组对Vp-16、MTX的敏感度明显高