氨酰-t RNA合成酶(Aminoacyl-t RNA synthetasethetases,简称AARS)是蛋白质合成过程中的关键酶。在肿瘤细胞中谷氨酰胺-t RNA合成酶(Gln RS)具有依赖于谷氨酰胺的抗凋亡作用。因此,研究谷氨酰胺-t RNA合成酶的结构、功能及其稳定性具有十分重要的意义。在克隆人谷氨酰胺-t RNA合成酶(Gln RS)基因基础上,通过构建表达载体p ET-28a-Gln RS,转化大肠杆菌BL21(DE3),0.33m M IPTG诱导,在16℃培养过夜,菌体表达活性蛋白量最大。蛋白粗提液先过Ni-柱纯化,然后过Q-柱再次纯化,最后得到电泳单一条带目的蛋白。利用同位素的方法测定表达的人谷氨酰胺-t RNA合成酶(Gln RS)活性,结果表明,大肠杆菌表达的Gln RS具有活性,并且谷氨酰胺(Gln)对Gln RS没有底物抑制作用。同时,构建了精氨酰-t RNA合成酶(Arg RS)表达载体,以期共表达Gln RS和Arg RS。通过增加谷氨酰胺-t RNA合成酶的稳定性来提高大肠杆菌表达Gln RS可溶性。此外,通过构建了Bacmid-Gln RS病毒载体,在家蚕Bm N细胞成功表达了谷氨酰胺-t RNA合成酶,得到了分子量略大于理论分子量的谷氨酰胺-t RNA合成酶。本文在原核和真核细胞成功表达了谷氨酰胺-t RNA合成酶(Gln RS),并对其活性以及酶与底物浓度之间的关系做了分析,其结果为今后进一步研究谷氨酰胺-t RNA合成酶的非经典功能和晶体结构奠定了基础。