荧光偏振分析方法具有操作简单、快速稳定的特点,并适合于高通量、自动化检测,目前已被广泛应用于生物传感和免疫分析检测等技术领域。近年来,基于适配体探针的荧光偏振分析方法不断发展,并用于多种生物分子的检测,其中如何实现偏振信号的放大是研究的关键与核心领域之一。本文重点探究了两种可显著增强荧光偏振信号的传感分析方法,具体工作如下:1.本部分工作构建了一种基于银纳米粒子和适配体的荧光偏振传感检测方法,并用于奶粉中乳铁蛋白质的高灵敏度、高选择性检测。首先将本实验室筛选出的适配体序列设计成剪切型适配体并进行结构优化,然后在其中一条剪切型适配体序列末端标记FITC荧光分子,并将另一条剪切型适配体修饰到银纳米粒子表面,最终,两条剪切型适配体探针在乳铁蛋白质存在条件下自组装成一个整体,导致银纳米粒子和荧光分子FITC之间的距离缩短,进而引发银纳米粒子对FITC的金属表面增强荧光作用和聚集体的质量放大效应。实验结果证明,优化后的两条剪切型适配体具有高亲和力和特异性,可结合到乳铁蛋白质分子的不同位点。通过同时利用质量放大、背景降低作用以及金属表面增强荧光三重信号放大作用,该传感检测方法的检测限降低了 3个数量级,可达到1.25 pM。建立的传感分析方法还成功实现了奶粉样品中乳铁蛋白质的定量检测。2.本部分工作主要设计了一种基于聚多巴胺修饰磁珠纳米粒子(MNP@PDA)的信号增强型荧光偏振传感器,并用于促红素-α(rHuEPO-α)的快速精准检测,通过磁性分离、纳米粒子与靶标蛋白质的质量放大效应实现了高灵敏度、高特异性地分析。总体上,该传感检测过程如下:依次将靶标分子rHuEPO-α和磁性纳米粒子MNP@PDA加入至适配体探针FAM-P1溶液中,二者分别与探针结合形成FAM-P1-rHuEPO-α以及FAM-P1-MNP@PDA复合物,两种复合物均可以一定程度上引起荧光偏振信号的增加。FAM-P1探针与MNP@PDA纳米粒子之间的强相互作用确保了高强度的信号放大作用以及高效率的靶标分离效果。实验结果表明,该传感平台用于靶标分子rHuEPO-α检测的检测限为0.12pM,相比于未信号放大方法降低了4个数量级。此外,我们选取了三种人重组促红素注射液来测试该传感平台在检测实际样品时的抗干扰能力。此工作也为其他生物分子的通用检测提供了一个简单快速、免修饰的分析方法。