rLj-RGD3是来源于日本七鳃鳗口腔腺的基因重组RGD毒素蛋白,含有3个RGD序列,分子量为14.5 kDa。前期工作表明,rLj-RGD3具有强效抗肿瘤功能。为了减少抗肿瘤功能蛋白rLj-RGD3在生物制药中的潜在免疫原性风险,本课题小组研究了其截短小肽rLj-RGD4对小鼠肺癌细胞的抑制作用。rLj-RGD4是以rLj-RGD3为野生型的缺失突变体小肽,其基因是以rLj-RGD3基因为原型设计的缺失突变体基因。rLj-RGD4基因经人工合成后,将其连接到pET23b载体上,对阳性重组子pET23b-RGD4进行了大肠杆菌E.coli BL21的转化及重组突变体蛋白的诱导表达与纯化,获得了含有4个RGD序列、分子量仅为6.27 kDa的基因重组蛋白rLj-RGD4。实验过程中以rLj-RGD3蛋白处理组作为阳性对照组,rLj-RGD4蛋白处理组作为实验组检测其对Lewis细胞生物学活性的影响。细胞增殖实验（MTT）表明,rLj-RGD4能够剂量依赖性地抑制小鼠Lewis肺癌细胞的增殖,抑制作用的IC₅₀为45.83μmol/L;细胞迁移实验结果表明rLj-RGD4能剂量依赖性的抑制由bFGF诱导的Lewis肺癌细胞的迁移;细胞浸润实验结果表明rLj-RGD4能明显抑制由bFGF诱导的Lewis肺癌细胞的浸润,且同样呈剂量依赖形式;Hochest 33258染色及流式细胞术结果显示,rLj-RGD4能显著诱导Lewis肺癌细胞发生凋亡;鬼笔环肽对细胞骨架进行染色,结果表明rLj-RGD4蛋白能够破坏细胞骨架结构;通过Western Blot法进一步研究rLj-RGD4作用于Lewis肺癌细胞的机制,实验结果表明其能使Caspase-3表达上调、BcL-2表达下调。虽然rLj-RGD4相比rLj-RGD3作用强度稍弱,但由于其是分子量只有6.27 kDa的小肽且有明显的抗肿瘤功能,更加具有抗肿瘤药物的应用前景。未来随着对rLj-RGD4研究的进一步深入,有望为我国抗肿瘤药物研发提供一类抗肿瘤候选新药。