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目的：筛选乙肝病毒(HBV)相关性肝癌患者血清中差异表达的miRNAs,分析其作为乙肝病毒相关性肝癌诊断标志物的价值及其在乙肝病毒相关性肝癌发生发展中的作用。方法：1.选择在肝癌组织和癌旁组织中存在差异表达的,miRNAs(miR-96、miR-18a、miR-10b、miR125a和miR-378),用real-time RT-PCR方法对小样本(15例HBV相关性肝癌患者和15例健康志愿者血清)检测其表达水平,以寻找在血清中可能存在差异表达的miRNAs。2.基于第一步筛选的结果,选择在HBV相关性肝癌患者血清中存在上调表达的miR-18a,用real-time RT-PCR方法对大样本(86例HBV相关性肝癌患者和45例健康志愿者)血清检测其表达水平,并分析其作为HBV相关性肝癌诊断标记的价值和与HBV相关性慢性肝病(肝炎及肝硬化)鉴别诊断的价值。3.采用慢病毒技术构建miR-378过表达慢病毒。4.在肝癌细胞HepG2和稳定表达HBV的肝癌细胞HepG2.2.15,用慢病毒介导上调在肝癌患者血清中下调表达的miR-378,采用MTT和克隆形成实验研究其在肝癌发生发展中的作用。5.生物信息学方法预测miR-378的靶基因,荧光素酶报告实验验证靶基因,并用western-blot方法在细胞水平研究上调miR-378表达对其靶基因表达的影响,分析miR-378在肝癌中作用的机制。结果：1.在15例HBV相关性肝癌患者和15例健康志愿者血清中检测5个miRNAs的表达水平,与健康对照比,miR-18a在肝癌患者血清中显著上调表达(p=0.003,Mann-Whitney检测,下同),而miR-378显著下调表达(p=0.044)。miR-96、1miR-10b和miR-125a在肝癌患者和健康对照间表达差异无显著性(p均>0.05)。2.选择血清中表现上调表达的miR-18a,进一步用大样本(86例HBV相关性肝癌患者和45例健康志愿者)验证其血清中miR-18a的表达水平,获得与第一步实验相似的结果,且差异具有统计意义(P<0.0001)。综合分析所有样本(101例HBV相关性肝癌患者和60例健康志愿者)的血清中miR-18a表达水平,受试者工作特征曲线(ROC曲线)显示,以niR-18a表达水平区分肝癌与正常人的曲线下面积为0.881,95%可信区间(CI)为0.829-0.933。以1.765为截断值,灵敏度为86.1%,特异度为75.0%。与30例HBV相关性慢性肝病(慢性肝炎和肝硬化)作血清miR-18a水平比较,肝癌患者血清miR-18a水平显著上调,差异具有统计意义(p<0.0001),曲线下面积为0.775(95%CI：0.681-0.869),以1.796为截断值,区分肝癌与慢性肝病的灵敏度为77.2%,特异度为70.0%。3.成功构建miR-378的慢病毒表达载体,测序证实所插入基因序列正确。荧光显微镜检测证实PGCSIL-miR-378能在293T细胞中表达。4.用miR-378慢病毒载体感染肝癌细胞HepG2.2.15和HepG2,并测定细胞增殖活性和克隆形成能力。结果显示,与空载体组比较,miR-378慢病毒载体感染组肝癌细胞的增殖活性降低和克隆形成减少,差异有统计学意义(p<0.05)5.用生物信息学方法预测Med19和IGF1R为miR-378的靶基因,荧光素酶报告实验结果显示,与对照(NC)组比,miR-378与Med193’-UTR共转染工具细胞HEK293组荧光素酶活性仅下降了9.7%,差异无统计学意义(p>0.05)。而miR-378与IGFIR3’-UTR共转染组荧光酶活性下降了41.8%,差异有统计学意义(p<0.01)。同时,在肝癌细胞中上调miR-378表达后,western-blot检测发现肝癌细胞中IGF1R蛋白表达水平显著降低。结论：1.在HBV相关性肝癌患者中,血清miR-18a显著上调表达,可作为HBV相关性肝癌的非侵入性诊断标志物,甄别肝癌患者与HBV相关性慢性肝炎、肝硬化患者及健康人。2.在HBV相关性肝癌患者中,血清MiR-378表现为下调表达。MiR-378可抑制肝癌细胞的增殖和克隆形成,起抑癌基因的作用,其作用是通过抑制其下游靶基因IGFIR发挥的。HBV导致的miR-378下调表达可能是HBV相关性肝癌发生发展的分子机制之一。