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近两年随着人B细胞培养技术和单细胞RT-PCR的发展,提高了人单克隆抗体的筛选速度,也提高了找到HIV广谱中和抗体的可能性。利用此类技术,2009年Laura M.Walker等从一个感染HIV-1 C亚型病毒的感染者体内分离到2株具有很强中和活性的抗体PG9和PG16,2010年Xueling Wu等报道从HIV-1感染者的B细胞中分离到了 1株能中和90%以上毒株的中和抗体VRC01。但最近研究发现随着时间的推移,HIV-1在流行过程中不断发生变异,对中和抗体的抵抗能力也越来越强,新近分离到的毒株对已知几种广谱中和抗体的抵抗力更强,但研究也发现即使这些毒株对其中的一种抗体产生了抵抗,但仍然能被其他的抗体所中和。这些研究提示,如果我们找到更多的中和抗体,将他们联合应用,就有可能预防感染,在治疗中也可能能够清除更多的病毒。在HIV-1感染者体内除了中和抗体以外,还有一些抗体虽然中和作用很弱或者没有中和作用,但仍然通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)杀伤 HIV-1 感染细胞。最近泰国 RV144 疫苗试验的结果显示,疫苗对受试者有一定的保护作用,对其保护机理的研究ADCC可能起到重要作用。在对长期不进展者的研究中也发现,ADCC反应与HIV病毒的长期不进展相关联。这些研究都显示ADCC在HIV疾病控制和疫苗研制中可能起重要作用。由于HIV-1不同亚型之间的差异很大,对中和抗体的敏感性也有所不同,我国的主要流行毒株包括B’亚型、CRF07_BC、CRF08_BC以及CRF01_AE等与欧美的流行株有很大差异,对已知广谱中和抗体的敏感性也较差,因此非常有必要从我国的HIV-1感染者体内筛选出对我国流行毒株有很强中和活性的抗体。本研究通过采集3例我国HIV-1感染者的抗凝全血,用淋巴细胞分离管分离出外周血单个核细胞(periphery blood mononuclear cell,PBMC),然后用磁珠分选纯化记忆性B细胞(memory B cell,Bmem)并体外活化培养,促使记忆性B细胞分泌抗体,用ELISA法识别阳性B细胞克隆,并提取阳性B细胞的RNA,一步法RT-PCR扩增抗体重链可变区和轻链可变区基因,并克隆到携带重链恒定区和轻链恒定区基因的表达载体中,再用携带重链基因的质粒和携带轻链基因的质粒以1:1共转染293T细胞,ELISA筛选阳性可变区基因。若转染上清中的Env特异性抗体为阳性,则将所得的携带阳性重链可变区基因的质粒和携带阳性轻链可变区基因的质粒大量转染293T细胞,获得大量HIV-1特异性人单克隆抗体,进行抗体特性的鉴定,检测其中和活性和ADCC活性。结果从这3例HIV-1感染者的记忆性B细胞中筛选出了 8株HIV-1 Env特异性人单克隆抗体,其中4株对HIV-1假病毒有不同程度的中和活性,另有3株具有很好的ADCC活性。说明本研究成功地引进了利用B细胞培养和RT-PCR技术从人体淋巴细胞中筛选特异性抗体基因的人单克隆抗体技术平台。用该技术可以成功获得HIV-1 Env特异性单克隆抗体,为将来从能产生高滴度广谱中和抗体的感染者体内筛选广谱中和抗体打下了基础。