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Ⅰ妊娠期糖尿病患者羊水量变化与其胎膜和胎盘组织中AQP8、AQP9表达关系的研究目的:研究妊娠期糖尿病孕妇羊水量变化与其胎膜和胎盘组织中AQP8、AQP9表达之间的关系,探讨AQP8、AQP9在妊娠期糖尿病异常羊水量中的调节作用,为妊娠期糖尿病患者羊水量异常的治疗提供新的思路。方法:选取2008年10月—2009年8月在重庆医科大学附属第一医院和重庆市妇幼保健院行足月剖宫产分娩(37-42周)的妊娠期糖尿病(GDM)羊水过多、羊水量正常患者各20例为研究对象,以同期足月择期剖宫产的正常孕妇20例为对照组。剖宫产术后取胎膜和胎盘组织。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测AQP8、AQP9 mRNA在各组胎膜和胎盘组织中的表达;采用免疫印迹(Western blotting)技术检测AQP8、AQP9蛋白在各组胎膜和胎盘中的表达水平。结果:(1)GDM羊水量过多组羊膜、绒毛膜及胎盘组织中AQP8 mRNA的表达水平分别为0.72±0.085、0.62±0.131、1.18±0.090,AQP9 mRNA水平分别为0.79±0.106、0.60±0.132、0.87±0.087;GDM羊水量正常组羊膜、绒毛膜及胎盘组织中AQP8 mRNA表达水平分别为0.50±0.068、0.61±0.120、0.84±0.074,AQP9 mRNA表达水平分别为0.51±0.072、0.58±0.058、0.63±0.062;对照组三种组织中AQP8 mRNA表达水平分别为0.47±0.041、0.56±0.085、0.82±0.096,AQP9 mRNA表达水平分别为0.49±0.094、0.55±0.096、0.61±0.044。羊膜和胎盘组织中,GDM羊水量过多组AQP8、AQP9 mRNA表达水平与GDM羊水量正常组及对照组分别比较,差异均有显著性(P<0.05),GDM羊水量正常组AQP8、AQP9 mRNA水平与对照组分别比较,差异无显著性(P>0.05);而绒毛膜组织中,三组AQP8、AQP9 mRNA表达水平组间比较差异无显著性(P>0.05)。(2)GDM羊水量过多组羊膜、绒毛膜及胎盘组织中AQP8蛋白的表达水平分别为0.54±0.044、0.47±0.112、0.90±0.098,AQP9蛋白水平分别为0.59±0.042、0.48±0.121、0.79±0.051;GDM羊水量正常组羊膜、绒毛膜及胎盘组织中AQP8蛋白表达水平分别为0.34±0.031、0.46±0.075、0.51±0.058,AQP9蛋白表达水平分别为0.30±0.061、0.44±0.096、0.48±0.039,对照组三种组织中AQP8蛋白表达水平分别为0.32±0.052、0.43±0.058、0.49±0.039,AQP9蛋白表达水平分别为0.28±0.031、0.42±0.102、0.47±0.047。羊膜和胎盘组织中,GDM羊水量过多组AQP8、AQP9蛋白表达水平与GDM羊水量正常组及对照组分别比较,差异均有显著性(P<0.05),GDM羊水量正常组AQP8、AQP9蛋白水平与对照组分别比较,差异无显著性(P>0.05);在绒毛膜组织中,三组AQP8、AQP9蛋白水平组间比较,差异无显著性(P>0.05)。结论:妊娠期糖尿病患者合并羊水量过多时,其羊膜和胎盘组织中AQP8、AQP9的mRNA和蛋白表达均上调;AQP8、AQP9可能在妊娠期糖尿病羊水量异常的调节机制中发挥重要作用。Ⅱ吲哚美辛对人羊膜上皮细胞AQP8表达的影响目的:本研究探讨吲哚美辛对人羊膜上皮细胞AQP8表达的影响,为其治疗羊水过多提供实验室依据,并为开发药物治疗羊水过多提供新的靶点。方法:通过酶消化法对羊膜上皮细胞进行原代培养,应用免疫细胞化学方法对人羊膜上皮细胞进行细胞鉴定。实验分为药物处理组和对照组。药物处理组加入不同浓度的吲哚美辛(10,20,50,100,200μM/L)孵育24小时,另以100μM/L吲哚美辛分别孵育羊膜上皮细胞6,12,24,36,48h。采用RT-PCR和Western blotting技术检测经吲哚美辛作用后羊膜上皮细胞AQP8 mRNA及蛋白表达的变化。结果:(1)不同浓度的吲哚美辛对羊膜上皮细胞AQP8 mRNA及蛋白表达具有下调作用,其200μM/L处理组的AQP8 mRNA及蛋白表达水平达峰值,与对照组比较差异有统计学意义(P < 0.01)。(2)100μM/L人羊膜上皮细胞6,12,24,36,48h,各相应时间点药物处理组与对照组比较,从12h开始AQP8 mRNA和蛋白表达水平低于对照组(P < 0.01)。且随着处理时间的延长,AQP8 mRNA和蛋白表达水平下降愈明显,当药物处理达48h达高峰。结论:吲哚美辛对人羊膜上皮细胞AQP8 mRNA和蛋白表达水平有下调作用。