目的:矽肺（Silicosis）是一类长时间地吸入二氧化硅（SiO₂）颗粒所导致的肺纤维化疾病,早期会出现多种炎症反应,发生间质转化并伴随着成纤维细胞的过度增殖,后期发展为不可逆的纤维化。关于矽肺的具体发病原理和机制并不明确,过去的研究多集中在SiO₂刺激肺泡巨噬细胞所释放的趋化因子和细胞因子的作用上,但关于肺成纤维细胞在矽肺中所起到作用的研究较少。而HECTD1作为E3泛素连接酶,与MCPIP1的去泛素化酶的功能是具有相关性,MCPIP1已经探明了其在巨噬细胞活化中的作用。所以本课题主要探索HECTD1在成纤维细胞活化中的作用,以及对肺纤维化进程的影响,同时引入circRNA,为矽肺的诊疗提供新思路。方法:1)HECTD1在SiO₂所诱导的成纤维细胞增殖活化中的作用。a)取对数生长期的人肺成纤维细胞（HPF-a）,使用SiO₂颗粒处理,蛋白免疫印迹法结合细胞免疫荧光检测HECTD1、成纤维细胞标志物表达量变化;b)使用气管滴注SiO₂的方法来构建矽肺小鼠模型,获取小鼠肺组织切片,免疫荧光检测成纤维细胞标志物和HECTD1的表达量;c)免疫荧光检测矽肺患者和健康志愿者的肺组织样品中纤维化标志物和HECTD1的分布和丰度差异;d)CRISPR/Cas9敲除HECTD1后,BrdU、MTT和胶收缩等实验检测细胞增殖和活力的变化;e)CRISPR/Cas9敲除HECTD1后,进行细胞划痕实验、3D基质巢式迁移实验来综合评估对HPF-a细胞迁移能力的改变。2)circHECTD1与HECTD1调控成纤维细胞活化的具体机制。a)WB检测SiO₂作用下HPF-a细胞中自噬相关标志物的表达量变化;b)特异性敲除HECTD1后,WB和LC3腺病毒检测自噬流水平;c)加入自噬的激动剂雷帕霉素,探究HECTD1是否通过自噬来影响成纤维细胞功能;d)qRT-PCR和原位杂交观察circHECTD1在HPF-a细胞中的表达和分部情况;e)采用慢病毒上调circHECTD1的表达,检测HECTD1表达量的变化以及后续的对细胞功能的影响。结果:1)与对照组比较,SiO₂可以诱导HPF-a中HECTD1表达量最多升高1.6倍,同时矽肺小鼠和矽肺病人肺组织中成纤维细胞内HECTD1呈高表达;SiO₂作用下,新生细胞数明显增多,活力也增加了30%,并且增强了迁移的能力;CRISPR/Cas9敲除HECTD1后,能够抑制HPF-a的增殖以及活化能力并大幅抑制迁移的发生。2)SiO₂刺激后,HPF-a内自噬标志物表达量明显升高,提示自噬的程度被增强;使用雷帕霉素处理后,可以显著逆转敲除HECTD1所带来的细胞功能的改变;SiO₂诱导circHECTD1下落到0.5倍,并且circHECTD1基本分布在细胞质中;慢病毒过表达circHECTD1可以引起HECTD1表达量下降,进而抑制成纤维细胞的活力和迁移。结论:HECTD1通过自噬介导了成纤维细胞活化、增殖、迁移等多个生命历程,进而影响肺纤维化的发生发展,而circHECTD1可以调控这一过程,为矽肺的相关研究提供了新的方向,也为进一步的临床治疗提供了新的路径。