论文部分内容阅读
天然来源的番茄红素是目前发现的自然界中最强的抗氧化剂,具有优越的生理功能。作为一种功能性色素,具有增强机体免疫力、防癌抗癌、抗菌消炎、保护心血管等多种生物学功能,素有“藏在西红柿里的黄金”之美称。玛咖(Lepidium meyenii Walp)是一种生长在秘鲁海拔37004500米安第斯山脉当地的十字花科植物,具有抗疲劳、抗氧化、提高生育能力、抑制前列腺增生、改善性功能等多种功效,因此受到世界各国的广泛关注。在所有的功效中,抗氧化功能被认为是行使所有功能的基础。因此玛咖、番茄红素在抗氧化研究方面尤为重要。本实验对玛咖、番茄红素提取物细胞抗氧化机制进行了初步的探究。实验主要分为以下几个部分:1.100μM、150μM、200μM、300μM、400μM浓度H2O2对PC12细胞处理4 h,MTT法测细胞存活率,确定H2O2浓度为150μM,建立细胞氧化损伤模型。2.梯度浓度玛咖、番茄红素提取物对PC12细胞预处理24 h后加入150μM H2O2处理4h进行氧化损伤,MTT法测细胞存活率。确定实验所用玛咖浓度为100、200、500μg/mL,番茄红素提取物浓度为500、600、800μg/mL。3.通过测定细胞外液中LDH的活力、细胞内自由基、脂质过氧化、谷胱甘肽(GSH)的水平和细胞内抗氧化酶活性,确定玛咖、番茄红素提取物具有抗氧化活性并且抗氧化效果好于VE和番茄红素标准品。最终确定了玛咖的最适浓度为500μg/m L,番茄红素提取物最适浓度为800μg/mL,并用最适浓度进行后续的研究。4.通过测定线粒体膜电位的变化,观察细胞早期凋亡情况。通过流式细胞仪测定细胞周期的变化,对玛咖、番茄红素提取物抗氧化机制进行了初步探究。结果表明,加入150μM H2O2后细胞线粒体膜电位下降,出现早期凋亡,但是通过流式测定显示细胞晚期凋亡不明显,S期细胞比例增加。加入玛咖和番茄红素提取物预处理后,细胞线粒体膜电位有了一定的恢复,S期阻滞降低,G2/M期细胞数目增多,说明细胞DNA损伤减少,细胞能够进行增殖。