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本课题选用三种分子量(Mn=750,2000,5000)的聚乙二醇单甲醚(mPEG)和壳聚糖(CS)作为基础材料,通过酰化反应合成不同接枝取代度(DS)的聚乙二醇单甲醚接枝壳聚糖(mPEG-g-CS),制备得到新材料mPEG750-g-CS(DS=9.1%),mPEG2000-g-CS(DS=4.1%,DS=8.5%,DS=18.2%,DS=40.3%)和 mPEG5000-g-CS(DS=8.7%)。以mPEG-g-CS为载体基础材料,制备包载抗肿瘤药物甲氨蝶呤(MTX)的纳米粒(MTX/mPEG-g-CS NP),考察了 mPEG分子量和取代度对MTX/mPEG-g-CS NP药代动力学和组织分布的影响。基于细菌外膜囊泡(OMV)的天然免疫原性,卵清白蛋白(OVA)作为一种常用的模型抗原蛋白,我们构建了一种细菌外膜囊泡(OMV)包被的载卵清白蛋白(OVA)的mPEG-g-CS纳米粒(OVA@OMV-mPEG-CS NP)给药系统,并用于小鼠鼻粘膜免疫的研究,为制备新型的鼻粘膜疫苗奠定基础。纳米给药系统最重要的作用之一是延长药物在体内的滞留时间。我们选用不同分子量mPEG对CS进行表面修饰,制得一系列不同接枝取代度的载MTX的mPEG-g-CS纳米粒。该载药纳米粒粒径为112.8～171.2 nm,Zeta电位为+7.4～35.0 mV,载药率为17.1%-18.4%。在pH 7.4的PBS中,MTX/mPEG-g-CS NP的释药均呈现先突释后缓释的特点。MTX/mPEG-g-CS NP体外细胞摄取实验表明,当mPEG的接枝取代度增加时,或mPEG分子量增加时,MTX的J774A.1 巨噬细胞内蓄积量均呈下降趋势。Sprague-Dawley大鼠体内药代动力学研究显示,随着mPEG接枝取代度增加,或mPEG分子量增加时,AUC0-72h(0-72小时内血药浓度-时间曲线下面积)均呈上升趋势。ICR小鼠体内组织分布实验表明,MTX/mPEG-g-CS NP可以显著增加药物在体内的血液循环时间,同时在肝、脾、肺中的蓄积水平下降。实验结果显示出mPEG-g-CSNP优良的药物递送能力。制备OMV包覆的载OVA的mPEG-CS纳米粒并用于小鼠鼻腔免疫效果评价。采用超滤离心法制备OMV。以OVA为模型药物,采用离子交联法制备OVA@mPEG-CS NP。采用机械挤出法制备OMV包覆的包载OVA的mPEG-CS纳米粒并表征。OVA@OMV-mPEG-CS NP溶液经Balb/c小鼠鼻腔给药,用ELISA法检测鼻腔灌洗液、空肠黏膜和粪便中特异性sIgA抗体水平。OMV包覆的mPEG-CS载药纳米粒径为167.8±10.3 nm,透射电子显微镜观察其具有核壳结构。给药14 d后,载OVA的OMV-mPEG-CS NP给药组在鼻腔灌洗液、空肠黏膜及粪便中sIgA抗体水平最高;与OMV+OVA给药组相比,载OVA的OMV-mPEG-CS NP给药组在鼻腔灌洗液、空肠黏膜及粪便中的OVA-sIgA抗体水平分别提高了 2.3、2.6和2.2倍,OMV-sIgA抗体水平分别提高了 2.3、2.6、1.9倍。该纳米给药系统能同时使OMV和OVA被摄取与呈递,产生较强的小鼠黏膜免疫诱导反应。