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脂肪酶是一种特殊的酯键水解酶,它可作用于甘油三酯的酯键,使甘油三酯降解为甘油二酯、单甘油酯、甘油和脂肪酸,还能催化水解脂、进行酯交换、酯合成等反应,广泛应用于油脂加工、食品、医药、日化等工业,是重要的工业用酶之一。低温碱性脂肪酶可在低温与常温下较好地发挥活性,在洗涤剂工业有良好的应用前景。本课题对实验室保藏的脂肪酶产生菌株Acinetobacter johnsonii G23的发酵培养基进行了优化,使其更适合后期的分离纯化,并采用离子交换层析对A. johnsonii G23产脂肪酶进行了分离纯化,优化了该脂肪酶纯化工艺条件,并得到相关纯化酶,为获得其氨基酸序列以及其定向改造和构效关系研究奠定了基础,同时还研究了该脂肪酶的基本酶学性质,并通过离子诱变的手段提高菌株产酶活力。对A. johnsonii G23优化后的发酵培养基成分为(w/v)：可溶性淀粉1%、大豆蛋白胨1.5%、K2HPO40.4%、MgSO40.04%、CaCl20.05%、PVA-大豆油2%、pH8.5。同时对A. johnsonii G23所产脂肪酶进行了分离纯化,发酵液经过离心、抽滤、硫酸铵沉淀、透析、超滤管浓缩、Hitrap Q HP阴离子交换层析等步骤处理后,SDS-PAGE电泳确定酶分子量为40kDa左右,比活力达90.25U/mg,纯化倍数达29.59倍,回收率达到13%。A. johnsonii G23所产脂肪酶酶学性质研究显示确定该脂肪酶最适作用温度是25℃,最适作用pH为8.0,属于低温碱性脂肪酶；热稳定性和耐碱能力良好；另外,该脂肪酶对氧化剂和洗衣粉添加成分稳定。实验表明,该脂肪酶在低浓度的有机溶剂下仍能保留一定的酶活,但是在有机溶剂浓度较高的情况下,耐受力变弱。N+注入诱变A. johnsonii G23后,获得了多株正突变株,其中突变株H-21的酶活力为20.92U/mL,比出发菌株G23酶活提高了153.8%,传代5次后,显示突变株能够稳定传代。