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目的: 探讨HBX基因对人肝癌细胞HepG2凋亡及凋亡相关基因表达的影响。
方法: 用脂质体转染法将HBX基因真核表达载体pcDNA3.1-X转入人肝癌细胞HepG2中，建立瞬时转染细胞模型(HepG2/HBXT)；G418筛选阳性克隆，反复传代，并且至少冻存1次，建立稳定转染细胞模型(HepG2/HBXs)。通过RT-PCR、免疫荧光和免疫印迹检测鉴定HBX基因在瞬时转染及稳定转染细胞中的表达。以转染空载体pcDNA3.1的HepG2(HepG2/pcDNA3.1)细胞和未转染的HepG2细胞为对照，取瞬时转染后24h、48h、72h、96h细胞及稳定转染细胞，作以下处理：行流式细胞术分析肝细胞凋亡率的变化；分别取细胞标本抽提RNA并以β-actin为内参，半定量RT-PCR法检测HBX mRNA和凋亡相关基因Fas mRNA、BaxmRNA、Bcl-2 mRNA表达量的变化。
结果: (1)瞬时转染及稳定转染均成功地将HBX基因转至HepG2细胞中，经RT-PCR、免疫荧光和免疫印迹法证实了瞬时转染及稳定转染细胞中均有HBX基因的表达。(2)瞬时转染后于24h、48h、72h、96h，HepG2/HBXT与HepG2/pcDNA3.1T细胞相比，细胞凋亡率、Fas mRNA表达量、Bax mRNA表达量均增高，而Bcl-2 mRNA表达量均减少，差别均有统计学意义(P<0.05)；HepG2/HBXT与HepG2细胞相比，细胞凋亡率、Fas mRNA表达量、Bax mRNA 表达量均增高，而Bcl-2 mRNA表达量均减少，差别均有统计学意义(P<0.05)；HepG2/pcDNA3.1T与HepG2细胞相比，细胞凋亡率、Fas mRNA表达量、Bax mRNA表达量及Bcl-2 mRNA表达量差别均无统计学意义(P>0.05)。(3)瞬时转染时HepG2/HBXT细胞HBX mRNA表达量随时间延长而逐渐增高(P<0.05)，其细胞凋亡率、Fas mRNA表达量、Bax mRNA表达量也均逐渐增高(P<0.05)，且HBX mRNA表达量与细胞凋亡率、Fas mRNA表达量、Bax mRNA表达量均呈正相关(P<0.05)；Bcl-2 mRNA表达量随时间延长逐渐减少(P<0.05)，且HBXmRNA表达量与Bcl-2 mRNA表达量呈负相关(P<0.05)。(4)稳定转染时，HepG2/HBXs与HepG2/pcDNA3.1s及HepG2细胞两两相比，细胞凋亡率、FasmRNA表达量、Bax mRNA表达量差别均无统计学意义(P>0.05)；而HepG2/HBXs细胞中Bcl-2 mRNA表达量较HepG2/pcDNA3.1s及HepG2细胞均增高，差别均有统计学意义(P<0.05)；HepG2/pcDNA3.1s与HepG2细胞相比，Bel-2 mRNA表达量差别无统计学意义(P>0.05)。
结论: (1)本实验成功建立了瞬时及稳定表达HBX的HepG2/HBX细胞模型。(2)瞬时转染时HBX基因可通过上调Fas、Bax，下调Bcl-2的表达，促进HepG2细胞凋亡。且随着HBX mRNA表达量逐渐增高，对Fas、Bax、Bcl-2基因的调节作用越明显，其促凋亡效应也越明显。(3)稳定转染时HBX基因对HepG2细胞Fas mRNA、Bax mRNA的表达影响不明显，但能上调Bcl-2 mRNA的表达；提示稳定转染时HBX基因促凋亡能力相对减弱，利于细胞增殖。(4)HBX mRNA的表达量不同时，其对HepG2细胞凋亡及凋亡相关基因的调节作用也不同，表明HBX表达量与细胞凋亡密切相关。