生防菌盾壳霉产生抗真菌物质及其特性和防病潜力研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:CNHTC01
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油菜菌核病是由核盘菌[Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary]引起的一种世界性分布的重要病害。重寄生菌盾壳霉(Coniothyrium minitans)是一种应用前景广阔的生防菌。前人对盾壳霉寄生核盘菌的机制及其防病潜力进行了深入研究。McQuilken et al.(2003)报道了盾壳霉抑制核盘菌菌丝生长的抗生机制,并从盾壳霉培养物中分离和鉴定出抗真菌物质(Antifungal substance,简称AFS)macrosphelideA。但对其产生的规律、基本特性、能否抑制核盘菌菌核及子囊孢子萌发、是否能够产生防病效果等问题还不明确。针对这些问题,我们开展了盾壳霉产生AFS及其特性和防病潜力研究。 用改良的查彼培养液(MCD)培养盾壳霉,制备含AFS的盾壳霉培养物滤液(MCDcm)。在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)上测定其对核盘菌菌丝生长、菌核萌发和子囊孢子萌发的抑制作用。结果表明:盾壳霉AFS对核盘菌菌丝生长具有明显的抑制作用。随MCDcm(含AFS)浓度(x)提高,抑菌活性(y)增强。两者之间的关系符合方程:y=19.268Ln(x)+44.152(R2=0.9703,P<0.01)。被抑制的核盘菌菌丝原生质出现颗粒化及外渗,菌丝细胞膨大,甚至溃解等异常现象。用MCDcm处理核盘菌菌核之后,菌核萌发延迟,但最终能完全萌发。说明盾壳霉AFS对核盘菌菌核没有致死效应,但有一定程度的毒害作用;在含有MCDcm的PDA平板上,核盘菌子囊孢子能够萌发,培养12h的萌发率达到99.4%,但芽管生长受到明显抑制,出现细胞膨大和生长受阻等症状。 采用MCD培养液和马铃薯葡萄糖培养液(potato dextrose broth,简称PDB)振荡培养(20℃,200r/min)的方法研究了菌株和培养基种类对盾壳霉产生AFS的影响。结果表明:盾壳霉野生菌株Chy-1及其突变菌株Uv-2003能够产生AFS,而Chy-1的另外两个突变菌株Uv-202和Uv-1731却不能产生AFS。在MCD培养液中,培养盾壳霉6d后即检测到AFS活性,培养12d~15d后,培养液对核盘菌菌丝生长的抑制率分别达到86.4%和89.7%。在3d~15d培养期间,培养液的pH值从4.6下降为3.6。在PDB培养液中,培养3d~15d后,培养液对核盘菌菌丝生长的抑制率低于17.8%。培养6d后,培养液的pH值从5.9(0d)上升至7.5,培养15d后,pH值下降为6.0。 分别以MCD和PDB为基础,研究碳源、氮源、磷酸盐和环境pH值对盾壳霉产生AFS的影响。在碳源试验中,以MCD为基础时,供试7种碳源中,盾壳霉利用6种碳源(可溶性淀粉、蔗糖、麦芽糖、葡萄糖、乳糖和果糖)能产生AFS。葡萄糖和果糖对盾壳霉产生AFS最为适宜,而山梨醇则不适宜。以PDB为基础时,7种供试碳源中,果糖和乳糖对盾壳霉产生AFS适宜,其它5种碳源
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