动植物蛋白酶等酶活力的共振散射光谱测定

来源 :广西师范大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:coral623
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第一部分: 绪论。介绍了共振散射技术理论及其在生化分析研究中的应用。介绍了木瓜蛋白酶、糜蛋白酶等五种蛋白酶活力测定的方法。综述了溶菌酶、辣根过氧化物酶的分析进展。 第二部分: 酪蛋白缔合微粒的共振散射光谱研究及其在木瓜蛋白酶活力测定中的应用在最佳实验条件下,木瓜蛋白酶催化水解酪蛋白(casein),剩余底物casein分别与三氯乙酸(TCA)、十二烷基苯磺酸钠(SDBS)、十二烷基硫酸钠(SDS)结合形成缔合微粒。该微粒在360 nm、400 nm、420 nm、470 nm、520 nm处产生5个共振散射峰,其中最强峰均位于470 nm。对于TCA-Casein-Papain 、SDBS-Casein-Papain、SDS-Casein-Papain三个体系,Papain的酶活力分别在0.024~4.8、0.048~4.8、0.096~7.2 USP/mL范围内与△I470nm之间呈现良好线性关系。检测限分别为0.00832、0.04068、0.0814 USP/mL。TCA共振散射光谱法(RSS)应用于嫩肉粉中木瓜蛋白酶活力测定,结果满意。 第三部分:四种动物蛋白酶活力的催化共振散射光谱测定在所选实验条件下,糜蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胃蛋白酶均能催化水解酪蛋白生成小分子产物。加入三氯乙酸可与剩余的酪蛋白结合形成缔合微粒并中止酶催化反应。该微粒在360 nm、400 nm、420 nm、470 nm、520 nm处产生5个共振散射峰,其中最强峰位于470 nm处。糜蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胃蛋白酶的酶活力分别在0.0012~0.06 U/mL、0.00024-0.04 U/mL、0.0002~0.006 U/mL、0.0006-0.024 U/mL范围内与470 nm处的散射光强度降低值△I470nm之间呈良好线性关系,其检出限分别为0.001148 U/mL 、0.000839 U/mL 、0.000156 U/mL、 0.000557 U/mL。该法应用于实际样品中糜蛋白酶活力测定,结果比较满意。 第四部分:溶壁微球菌的共振散射光谱研究及其在溶菌酶活力测定中的应用溶壁微球菌在360 nm、400 nm、420 nm、470 nm 和520 nm处产生5个共振散射峰,菌浓度在2.0×106~9.3×108个/mL范围内与共振散射光强度I470nm有良好的线性关系。基于溶菌酶对溶壁微球菌的催化水解作用导致体系I470nm降低,建立了一个检测0.24~40 U/mL(即0.012~2 μg/mL)溶菌酶的共振散射光谱新方法,其检出限(3σ)为0.014 U/mL(即0.0007 μg/mL)。该法测定唾液样品的分析结果与比浊法结果一致,两种方法结果的线性回归方程的斜率、相关系数和截距分别为0.9665、0.9973和-87.50。 第五部分:辣根过氧化物酶活力的催化共振散射光谱测定在所选实验条件下,辣根过氧化物酶催化H2O2氧化KI生成I2,过量的I-与I2可结合形成I3-,而I3-分别与罗丹明S(RhS), 罗丹明G(Rh6G),罗丹明B(RhB), 丁基罗丹明B(b-RhB)结合形成(Rh+ -I3-)缔合微粒,在320 nm、424 nm、508 nm、和610 nm处产生较强的共振散射效应。但四体系在610 nm处的共振散射均分别受RhS 556 nm、Rh6G 556 nm、RhB 580 nm、b-RhB 580 nm处同步荧光峰的影响。对于RhS、Rh6G、RhB、b-RhB四体系,辣根过氧化物酶的浓度分别在3.2×10-12g~4.8 ×10-9g /mL、2×10-11g~3.2 ×10-9g /mL、1.6×10-11g~3.2 ×10-9 /mL、1.6×10-11g~4×10-9 g /mL范围内与其在424 nm处的共振散射强度成线性关系,其检出限分别为2.2 ×10-12g /mL、2.5 ×10-12g /mL、4.4 ×10-12g /mL、2.6 ×10-12g /mL。该法应用于酶联免疫乙肝试剂盒中辣根过氧化物酶活力的测定,结果比较满意。
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