NELL1慢病毒载体转染人牙周膜干细胞对其成骨分化影响的实验研究

来源 :中国人民解放军军医进修学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mingxing020
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背景:NELL1,一种与人颅缝早闭症(craniosynostosis,CS)颅缝过早融合相关的新型分泌型蛋白,能促进间充质干细胞的成骨分化。目的:研究NELL1对人牙周膜干细胞(humanperiodontalligamentstemcells,hPDLSC)体外成骨分化的作用并初步探讨其作用机制。方法:构建携带NELL1的慢病毒载体(lenti-NELL1),用以转染hPDLSCs,经矿化诱导液诱导培养后,通过检测成骨标志物碱性磷酸酶(alkalinephosphate,ALP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)及钙沉积来评估NELL1对hPDLSCs的骨诱导作用。同时real-timePCR检测成骨重要的转录因子(Msx2、Runx2)mRNA的表达变化。实验以只携带报告基因EGFP的空载体lenti-EGFP转染的hPDLSCs为对照。结果:WesternBlot及real-timePCR证实构建的lenti-NELL1转染hADSCs能成功表达有生物学活性的NELL1蛋白。与对照相比,lenti-NELL1组ALP、OCN、钙沉积及Msx2mRNA都显著提高(p<0.01),而两组间Runx2mRNA无显著差异(p>0.01)。结论:构建编码NELL1基因的慢病毒lenti-NELL1能够成功感染hPDLSCs并使之长期稳定表达有生物学效应的NELL1。NELL1能显著促进hPDLSCs的成骨分化,在诱导成骨分化时,除了作为Runx2的下游介质外NELL1还与Msx2存在密切联系,慢病毒介导的NELL1体外基因治疗可能是一种理想的实现牙周再生的治疗策略。
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