木霉菌对植物的促生效果及其机理的研究

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木霉属(Trichoderma spp.)真菌是一类对多种植物病原真菌具有拮抗作用的重要生防因子。对于目前研究较为深入的木霉菌生防机制,大多集中在微生物之间的相互作用,而忽略了寄主植物的参与。近年来人们发现,有些木霉属菌株可以稳定定植在植物根部并引起植物新陈代谢的改变、诱导植物抗性、增加养分利用率、促进植物生长、提高作物产量,同时也发现木霉对植物的促生作用因种而异,对于其机制的研究国内外仍处于不断完善的阶段。本文通过对多功能木霉菌株的筛选、木霉的促生效果及其促生机理的研究,为今后利用生防木霉菌制各兼具防病增产作用的新型生物有机肥料提供科学的理论依据。具体结果如下:1、多功能木霉菌株的筛选及鉴定:以生防效果、ACC脱氨酶活性、植酸酶活性及盆栽促生效果为指标筛选多功能木霉菌株。结果显示:木霉菌株LT19对多种病原真菌具有拮抗作用,并能产生ACC脱氨酶、胞外植酸酶;盆栽试验显示,该菌株可促进黄瓜幼苗的生长并能提高幼苗的抗逆能力。经形态鉴定和rDNA-ITS序列分析,将菌株LT19鉴定为棘胞木霉(Trichoderma asperellum)。2、棘胞木霉LT19的促生效果:制备菌株LT19的发酵液、孢子悬浮液及菌剂,研究其对黄瓜萌发率、胚根发育、幼苗生长、根系发育等生长指标的影响。结果显示:100×发酵稀释液浸种使黄瓜种子萌发率提高28.02%。孢子悬浮液可以促进黄瓜胚根的发育,与对照相比,胚根长、侧根原基数目均有明显增加。盆栽试验显示,木霉制剂处理幼苗20d后处理组与对照组差异显著,株高、鲜重分别增加了23.23%、70.04%。此外,幼苗叶片中的硝态氮、叶绿素、可溶性糖及蛋白质含量均有明显提高。3、棘胞木霉LT19促生机制的研究:从棘胞木霉LT19提高黄瓜对营养元素的吸收率、分泌植物生长调节剂以及改变黄瓜内源激素水平方面研究了该菌株对黄瓜的促生机制。研究发现,棘胞木霉LT19可产生植酸酶,并能降低培养基pH值,将不溶性的磷酸钙转化成有效磷,幼苗叶片磷含量比对照提高了13.92%。另外,培养基中有色氨酸诱导时,用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)检测到发酵液中有IAA的产生;用木霉制剂处理黄瓜幼苗时,黄瓜的内源激素水平有增高的趋势,并与幼苗的株高、鲜重成正相关,处理第20d时IAA含量比对照增加了28.42%。4、棘胞木霉LT19对镰刀菌重寄生机制的研究:有人认为木霉的生防作用是木霉促进植物生长的间接机制。棘胞木霉LT19的生防机制包括竞争作用、重寄生作用、抗生作用及诱导相关抗性酶的产生。盆栽实验显示,菌株对黄瓜枯萎病菌的防效达到83.33%。但对峙培养发现,棘胞木霉LT19对不同专化型的镰刀菌重寄生能力不同,因此本研究从病菌细胞壁糖蛋白和生防菌胞外蛋白酶的角度研究了棘胞木霉LT19对镰刀菌的重寄生机制。利用半定量RT-PCR检测了不同专化型镰刀菌细胞壁糖蛋白FEM1p基因表达量的高低,并测定了其细胞壁糖蛋白的含量。结果显示:FEM1p基因的表达量高低及细胞壁糖蛋白含量与木霉菌株LT19对镰刀菌的重寄生能力成负相关。进一步用紫外线诱变方法获得生防菌株LT19胞外蛋白酶正负突变株,平板对峙培养结果显示:木霉胞外蛋白酶活力增强46.80%的正突变株△LT19-30对病菌的重寄生作用增强,木霉胞外蛋白酶活力降低35.41%的负突变株△LT19-6对病菌的重寄生作用显著降低,从而明确了病菌细胞壁糖蛋白在自身防卫反应中的作用及棘胞木霉LT19对不同专化型镰刀菌重寄生差别的机制。
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