三种牙本质脱敏剂对L929细胞毒性的体外研究

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目的:利用噻唑盐比色法(MTT法)、活死细胞检测法及细胞增殖核抗原(PCNA)检测,比较研究三种牙本质脱敏剂Gluma desensitizer(Heraeus)、Pulpdent Dentindesensitizer(Pulpdent Corporation)及Vivasen(sIvoclar Vivadent)对小鼠成纤维细胞L929的细胞毒性。方法:实验分为三部分。第一部分,噻唑盐比色法(MTT法):将三种脱敏剂分别稀释成0.1、0.3、0.5、1.0、1.5μl/ml五个浓度,采用MTT法检测对L929的细胞毒性,同时设立空白对照组,统计各组的OD490值,计算相对增殖率(RGR)进行毒性分级。第二部分,活死细胞检测:取三种脱敏剂的0.3、0.5μl/ml两个浓度,并设空白对照组,免疫荧光化学技术染色,显微镜下观察并统计随机视野内死亡细胞率。第三部分,细胞增殖核抗原(PCNA)检测:取三种脱敏剂的0.5μl/ml浓度,并设空白对照组,免疫荧光化学技术染色,激光共聚焦显微镜下观察并统计随机100个细胞中的PCNA阳性细胞数。结果:Gluma和Pulpdent各浓度组与对照组间及各浓度组间OD值差异均有统计学意义(P<0.05),且OD值随脱敏剂浓度的增高而呈下降趋势,Gluma和Pulpdent之间无统计学意义(P>0.05)。Vivasens的1.5μl/ml及0.1μl/ml浓度组与对照组差异有统计学意义,且各浓度组间OD值差异无统计学意义。Gluma与Pulpdent在浓度为0.1μl/ml时毒性分级1级,在0.3及0.5μl/ml时毒性分级2级,在1.0μl/ml时毒性分级3级,在1.5μl/ml时毒性分级4级,Vivasens各浓度毒性分级均为0级。活死细胞检测结果显示,在0.3及0.5μl/ml浓度下,Gluma及Pulpdent组与对照组比较细胞死亡率差别有统计学意义(P<0.05),Vivasens与对照组比较细胞死亡率差别无统计学意义(P>0.05),Gluma与Pulpdent组间比较差别无统计学意义(P>0.05),Gluma与Vivasens之间,Pulpdent与Vivasens之间比较有统计学意义(P<0.05)。在Gluma组及Pulpdent组,各浓度组及对照组之间比较均有统计学意义(P<0.05),Vivasens组,各浓度组及对照组之间均无统计学意义(P>0.05)。PCNA免疫荧光结果得出,Gluma及Pulpdent组与对照组比较阳性细胞率差别有统计学意义(P<0.05),Vivasens与对照组比较阳性细胞率差别无统计学意义(P>0.05),Gluma与Pulpdent组间比较差别无统计学意义(P>0.05),Gluma与Vivasens之间,pulpdent与Vivasens之间比较有统计学意义(P<0.05)。结论:通过本次试验可以推断Gluma与Pulpdent具有明显的细胞毒性,并且随脱敏剂浓度的增大,细胞毒性增加,但Gluma与Pulpdent之间的细胞毒性无明显差别,Vivasens各浓度均无明显的细胞毒性。
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