【摘 要】
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本试验通过给肉仔鸡饲喂艾蒿多糖(AAP),探讨AAP对肉仔鸡免疫和抗氧化功能的影响,并利用体内法和体外法相结合,探讨AAP对肉仔鸡免疫和抗氧化功能的调节机制。主要研究内容及结果如下:试验一:艾蒿多糖的提取、分离纯化本试验旨在对艾蒿多糖进行提取和分离纯化,并对纯化后的艾蒿多糖进行结构表征,为后续动物试验和淋巴细胞体外试验提供试验材料。本试验共包含两部分。试验(1):采用热水浸提-乙醇沉降的方法提取艾
【基金项目】
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国家自然科学基金项目资助,项目编号:31660674;
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本试验通过给肉仔鸡饲喂艾蒿多糖(AAP),探讨AAP对肉仔鸡免疫和抗氧化功能的影响,并利用体内法和体外法相结合,探讨AAP对肉仔鸡免疫和抗氧化功能的调节机制。主要研究内容及结果如下:试验一:艾蒿多糖的提取、分离纯化本试验旨在对艾蒿多糖进行提取和分离纯化,并对纯化后的艾蒿多糖进行结构表征,为后续动物试验和淋巴细胞体外试验提供试验材料。本试验共包含两部分。试验(1):采用热水浸提-乙醇沉降的方法提取艾蒿中粗多糖(AAP),采用凝胶渗透色谱和液相色谱法检测AAP分子量及单糖组成。结果表明:AAP平均分子量为16 k Da,由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、岩藻糖组成。试验(2):使用DEAE-52阴离子交换柱进一步分离纯化AAP,采用电子扫描显微镜(SEM)、凝胶渗透色谱(GPC)、液相色谱(LC)法检测纯化后的AAP的分子量、单糖组成和形态结构。结果表明:经过DEAE-52阴离子交换柱层析得到AAP-Ⅰ,SEM图像呈现多空隙、松散的海绵絮状结构,经放大后可以看到立方体状颗粒、长链片状、圆球状等三种不同形态结构,其平均分子量为18 k Da,单糖组成同AAP。试验二:艾蒿多糖对肉仔鸡免疫和抗氧化功能的影响本试验通过给肉仔鸡饲喂不同剂量的艾蒿粗多糖以及金霉素,与空白对照组做比较,研究艾蒿多糖对肉仔鸡生长性能、免疫和抗氧化功能的影响,探讨艾蒿多糖替代抗生素的可行性,为艾蒿多糖在肉仔鸡饲粮中的合理应用提供理论依据。本试验采用单因子随机区组试验设计,选取288只1日龄AA肉仔鸡,随机分为6个处理,每个处理6个重复,每个重复8只鸡。其中对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮的基础上分别添加250、500、750、1000 mg/kg的AAP和50 mg/kg的金霉素,试验期42 d。结果表明:AAP添加剂量在750 mg/kg时,对肉仔鸡生长、免疫及抗氧化功能的调控效果较好,有望替代金霉素在肉仔鸡饲粮中使用。试验三:艾蒿多糖对肉仔鸡免疫和抗氧化功能的分子调控机理研究本试验在试验二的基础上,进一步研究艾蒿粗多糖对肉仔鸡免疫和抗氧化功能的分子调控机理。试验设计同试验二,测定指标为肉仔鸡肝脏、脾脏以及肠道组织中免疫及抗氧化酶基因的表达量。结果表明:饲粮中添加AAP可提高肉仔鸡免疫和抗氧化酶基因的表达量,且激活肉仔鸡组织中TLR/NF-κB信号通路。试验四:艾蒿多糖对肉仔鸡外周血淋巴细胞免疫和抗氧化功能的影响本试验通过在肉仔鸡外周血淋巴细胞(PBLs)培养液中添加梯度艾蒿多糖进行体外培养,研究不同剂量艾蒿多糖(AAP-Ⅰ)对PBLS免疫和抗氧化功能的影响,筛选适宜添加剂量,为后续试验提供依据。本试验采用单因子随机试验设计,即AAP-Ⅰ添加水平共设6个处理(0、50、100、150、200和250μg/m L),每个处理8个重复。结果表明:AAP-Ⅰ在体外具有显著的免疫调节及抗氧化功能;200μg/m L AAP-Ⅰ可作为体外研究其免疫和抗氧化调节机制的适宜添加量。试验五:艾蒿多糖通过TLR/NF-κB途径对肉仔鸡外周血淋巴细胞免疫和抗氧化功能的分子调控机制研究本试验在试验四的基础上,通过对细胞膜上的受体TLR2和TLR4分别使用相应的抑制剂C29(TLR2抑制剂)和TAK-242(TLR4抑制剂)进行抑制试验,旨在研究艾蒿多糖是否通过TLR2、TLR4受体进行信号传导,进而发挥其免疫和抗氧化机制。试验共包括两部分。试验(1):采用2×2二因子试验设计,随机分为4个处理组,每个处理组六个重复。试验分为AAP-Ⅰ(-)+C29(-)组、AAP-Ⅰ(+)+C29(-)组、AAP-Ⅰ(-)+C29(+)组、AAP-Ⅰ(+)+C29(+)组。结果表明:AAP-I可以增加TLR2下游的NF-κB和细胞因子的基因表达,调控TLR2/NF-κB信号通路,发挥免疫调节和提高抗氧化功能的作用。试验(2):采用2×2二因子试验设计,随机分为4个处理组,每个处理组六个重复。试验分为AAP-Ⅰ(-)+TAK-242(-)组、AAP-Ⅰ(+)+TAK-242(-)组、AAP-Ⅰ(-)+TAK-242(+)组、AAP-Ⅰ(+)+TAK-242(+)组。结果表明:AAP-I可以增加TLR4下游的NF-κB和细胞因子的基因表达,调控TLR4/NF-κB信号通路,发挥免疫调节和提高抗氧化功能的作用。
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