目的：恶性淋巴瘤(malignant lymphoma, ML)是原发于淋巴结和（或）结外淋巴组织的恶性肿瘤，其发生大多与免疫应答过程中淋巴细胞增殖分化产生的某种免疫细胞恶变有关，是免疫系统的恶性肿瘤。由于遗传因素、环境中物理及化学因素等的影响，儿童恶性淋巴瘤发病率呈逐年上升趋势，严重威胁着儿童的健康与生命。小儿恶性淋巴瘤无论在临床表现、组织病理类型还是治疗反应上均与成人恶性淋巴瘤不同，有其独特的生物学特性，如：潜伏期短、生长迅速、侵袭性强等。目前联合化疗仍是治疗恶性淋巴瘤的主要手段，但化疗的毒副作用以及多药耐药是影响患儿长期生存的重要因素之一。多种靶向药物的问世如利妥昔单抗（Anti-CD20)、Anti-CD22单抗，它们的临床应用提高了B细胞型淋巴瘤的缓解率。T细胞型淋巴瘤目前尚未发现靶向药物，临床预后仍较差。细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells CIK)是一种新型的免疫活性细胞，是将人外周血单个核细胞在体外多种细胞因子刺激下，获得的一群异质细胞，同时兼具有T淋巴细胞的强大抗瘤活性和自然杀伤细胞（natural killercell NK）的非主要组织相容性复合体(major histocompatibility complexMHC)限制杀瘤两种特点。 Survivin是凋亡蛋白抑制剂(Inhibitor ofapoptosis protein, IAP)家族中的成员之一，具有抑制细胞凋亡、调节细胞周期和分裂的功能。Livin是最近发现的一个凋亡抑制蛋白家族的新成员，是独立于Bcl-2的抗凋亡蛋白。Livin主要存在于细胞质中，且以丝状形式表达，同时也在细胞核中表达。Livin是通过以下途径来完成抗凋亡作用的：①通过拮抗死亡受体途径；②抗化疗药物介导的细胞凋亡作用；③抗线粒体介导的凋亡作用。Livin可以通过直接与Caspases结合来抑制其活性，拮抗细胞凋亡，还可以分解Smac，从而阻止其对XIAP的拮抗作用，间接抑制Caspases来调控细胞的凋亡。研究表明，Livin在正常成人组织如脾、胸腺、前列腺、睾丸、小肠、结肠、卵巢、肝、肺、脑、骨骼肌和淋巴细胞以及外周血中不表达或低表达，大多数肿瘤中高表达，如肺癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、膀胱癌、胃癌、结肠癌、黑色素瘤和白血病等。本实验通过研究脐血CIK细胞对Livin、Survivin的影响进而研究其抗肿瘤作用可能的分子机制，为脐血CIK细胞治疗恶性淋巴瘤的临床应用提供理论依据。方法：体外培养T细胞淋巴瘤Jurkat细胞及脐血CIK细胞，分为阿糖胞苷组、脐血CIK细胞组、阿糖胞苷联合脐血CIK细胞组、对照组。应用RT-PCR法检测肿瘤细胞特异性凋亡蛋白Livin、Survivin mRNA的表达水平；MTT比色法检测杀伤率；流式细胞术（FCM）检测培养脐血CIK细胞的上清液与Jurkat细胞作用后的凋亡情况。计量资料采用均数±标准差(X±S)表示，实验数据用SPSS13.0软件进行统计学分析。各组均数的比较行单因素方差分析(ANOVA)，各组间两两比较采用SNK法(Student-Newman-Keuls)，检验水平α=0.05，P<0.05视为差异有统计学意义。结果：1RT-PCR检测结果显示：CIK细胞、阿糖胞苷作用于Jurkat细胞24h、48h后，肿瘤细胞的特异性凋亡抑制因子Livin、Survivin的mRNA表达量均低于对照组，其中CIK细胞联合阿糖胞苷组明显低于对照组，且48h后各实验组Livin-αA值/β-actinA值、Livin-βA值/β-actinA值、SurvivinA值/β-actin A值均小于24h的比值（A为电泳条带的灰度值）具有统计学差异(P<0.05)。说明CIK细胞通过下调凋亡抑制因子Livin、Survivin的mRNA表达来促进Jurkat细胞的凋亡，并呈时间依赖性。2MTT比色试验结果显示：预实验CIK细胞与Jurkat细胞效靶比5:1、10:1、15:1、20:1作用12、24，48h后，与对照组相比，各组吸光度值(OD)均有不同程度的下降。各实验组与对照组相比均有统计学差异(P<0.05)。即CIK细胞作用于Jurkat细胞后随着效靶比增高及作用时间的延长，CIK细胞对Jurkat的杀伤作用逐渐增强，呈浓度-时间依赖性。实验组显示阿糖胞苷10μmol/L、CIK细胞（效靶比：20:1）、阿糖胞苷10μmol/L联合CIK细胞（效靶比：20:1），各组吸光度（OD）均有不同程度的下降，其中阿糖胞苷联合CIK细胞组吸光度下降最明显，各实验组与对照组均有统计学意义（P<0.05），杀伤率的计算结果显示阿糖胞苷联合脐血-CIK组最高达(61.23±4.6)％，是单用阿糖胞苷的1.41倍，是单用CIK组的1.34倍（P<0.05）。3流式细胞术检测结果显示：镜下观察见Jurkat细胞，与CIK细胞上清液共同培养12h后，有少部分淋巴瘤细胞出现皱缩、凋亡，而24h后出现凋亡峰，48h后淋巴瘤细胞凋亡数明显增多，对照组未出现凋亡峰。与对照组相比，实验组肿瘤细胞凋亡率显著增高(P<0.05)，24h凋亡率为(31.2±2.9)％，48h凋亡率为(38.6±3.6)％，实验组间比较，随作用时间的延长，凋亡率呈上升趋势，组间差异显著(P<0.05)。表明CIK细胞可通过释放到胞外的各种细胞因子诱导细胞凋亡来杀伤肿瘤细胞，且呈时间依赖性。结论：1脐血CIK细胞能够诱导淋巴瘤Jurkat细胞凋亡，并可使Jurkat细胞中Livin、Survivin mRNA的表达下降，并呈明显的时间依赖关系，认为脐血CIK通过下调Livin、Survivin的表达来促进淋巴瘤细胞的凋亡。2脐血CIK细胞体外对T淋巴瘤细胞（Jurkat细胞株）生长具有明显的抑制作用，且在效靶比在5:1-20:1范围内呈时间、剂量依赖性。3脐血CIK细胞通过释放细胞因子来诱导杀伤Jurkat细胞，且呈时间依赖性。4脐血CIK联合化疗药物（阿糖胞苷）作用于淋巴瘤细胞，抗肿瘤作用明显强于其中一种的抗肿瘤作用，为临床联合化疗药物治疗淋巴瘤提供了实验依据。