淡色库蚊arrestin基因克隆及其在抗药性中作用的初步研究

来源 :南京医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:ARMYUN1981
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淡色库蚊(Culex pipiens pallens)是我国重要的家栖性传病媒介,严重危害人类健康。化学防制是控制蚊媒的有效手段。随着杀虫剂的长期大量使用,蚊媒对杀虫剂的抗性随之发生发展。鉴定新的抗药性基因并研究其如何参与抗药性机制,已成为媒介抗药性领域新的研究热点。本实验室前期研究发现并证明,视蛋白基因(opsin)为蚊抗药性相关基因。在进一步研究其抗性机制中发现,arrestin可能也参与蚊对溴氰菊酯抗性,另有文献报道,在致倦库蚊抗氯菊酯品系和果蝇抗DDT品系中,其arrestin较敏感品系高表达。在此基础上,本课题通过PCR方法,从淡色库蚊抗性品系中扩增arrestin基因的ORF序列,并采用RACE法扩增其5’和3’末端,对位拼接获取全长序列;通过实时荧光定量PCR分析arrestin在淡色库蚊敏感品系和抗性品系各发育阶段中的表达;随后,在蚊细胞水平先后通过转染高表达和RNAi低表达的方法,用CCK8方法检测arrestin对蚊细胞溴氰菊酯敏感性的影响,同时通过过荧光实时定量PCR检测蚊抗药性基因CYP6A1和opsin的表达水平。本研究获得了淡色库蚊arrestin基因的全长cDNA序列,编码384个氨基酸(GenBank ID: HQ833831,2011)。其推导的氨基酸序列与致倦库蚊、冈比亚按蚊、黑腹果蝇的arrestin同源性分别为99%、92%、71%。荧光定量PCR结果显示,arrestin基因在淡色库蚊抗性和敏感品系的不同发育阶段均有表达,其中在卵、蛹和成虫阶段,抗性品系中较敏感品系高表达(p<0.05)。蚊细胞高表达arrestin后,细胞对溴氰菊酯的敏感性降低,CYP6A1和opsin的表达增高;蚊细胞低表达arrestin(siRNA介导的arrestin基因沉默)后,细胞对溴氰菊酯的敏感性增加,CYP6A1和opsin的表达降低。以上结果表明,arrestin为一新的蚊抗药性基因, arrestin可能通过与视蛋白一起作用,改变与拟除虫菊酯抗性相关的细胞色素P450的表达,参与蚊对溴氰菊酯的抗性。本研究首次报告蚊arrestin为一新的抗药性基因,并初步探讨了arrestin参与抗药性的机制。本研究结果为进一步阐明抗药性的分子机制,建立抗药性的检测方法和治理抗药性提供了新的科学依据,具有重要的理论意义和潜在的实际应用价值。
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