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研究背景人血清白蛋白是一种带负电荷的可溶性蛋白质，约占血清总蛋白的50%。白蛋白可与一些外源性和内源性因子相结合，起运输作用。在血清蛋白质组学研究中，一般首先要去除白蛋白等高丰度蛋白，进而发现低丰度蛋白中潜在的疾病相关蛋白质标志物。然而，高丰度蛋白去除会造成某些低丰度蛋白质的损失，干扰蛋白质组学分析，而这些低丰度蛋白中可能包含某些潜在的蛋白质标志物信息。为此，研究者开始着眼于血清高丰度蛋白结合的蛋白质和多肽成分分析，尤其以“白蛋白组”为研究重点。目前白蛋白组富集的常用方法主要有基于抗体/树脂的亲和吸附法和蛋白质沉降法，但一定程度上存在成本较高、蛋白易变性或非特异性结合等缺陷，不太适用于临床大样本的蛋白质标志物筛选，需要建立一种效率高且操作简便的白蛋白组富集方法。目的本研究拟通过聚乙二醇-乙醇(PEG-EtOH)两步非变性沉淀法富集血清白蛋白并进行相应的组学分析，建立一种分离纯化效率高、方便快捷且价格低廉的人血清白蛋白组富集方法。方法1.通过PEG-EtOH两步非变性沉淀法富集血清白蛋白组(1)经肘正中静脉采集血液，离心分离血清。血清离心去脂后分装保存，以备后续实验使用。(2)采用不同浓度的PEG4000和PEG6000溶液进行血清蛋白质沉淀，使用Western blot方法分析免疫球蛋白(IgG)的沉淀效率。(3)选择最佳IgG沉淀效率点，将PEG沉淀后血清上清继续进行乙醇沉降，以富集白蛋白组，并使用Western blot方法分析上清所含PEG对乙醇沉降步骤的影响。2.新建立的两步沉淀法与Protein G-EtOH方法的比较(1) Protein G-EtOH法：利用Protein G琼脂糖珠去除血清中IgG后，采用42%乙醇沉淀分离白蛋白组。(2)通过二维凝胶电泳分析比较两种方法富集的血清白蛋白组的分布情况。(3)通过LC-MS/MS分析鉴定并比较两种方法富集的血清白蛋白组。结果1. PEG-EtOH两步非变性沉淀法的建立通过检测不同浓度的PEG4000或PEG6000的血清蛋白质沉淀，发现IgG去除的最佳PEG浓度均为12%。针对12%PEG沉淀后血清上清中白蛋白组，采用乙醇沉淀法进行富集，发现上清所含PEG不会影响乙醇沉降效率，白蛋白富集的最佳乙醇浓度为42%。2. PEG-EtOH与Protein G-EtOH方法的比较将两种方法富集的白蛋白组进行双向电泳，比较凝胶图谱，并对差异蛋白点并进行质谱分析，发现Protein G-EtOH方法富集的白蛋白组中所检测出的差异蛋白点主要为Alpha-1-antitrypsin和VitaminD-binding protein两种高丰度蛋白。采用液相色谱-串联质谱法对两种方法富集的白蛋白组进行检测，共有53种蛋白或多肽均可从三组样品中检出。结论利用聚乙二醇-乙醇两步非变性沉淀法可以高效富集人血清白蛋白质组，且富集效率与传统方法无明显差异。