摘要：冠状病毒、流感病毒和人免疫缺陷病毒(HIV)是三种重要传染病的病原体。冠状病毒S蛋白、流感病毒HA和HIV-1Env蛋白有多重生物学功能,参与病毒的感染、粒子装配和致病过程。三者均属于Ⅰ型病毒膜蛋白,通常被切割为两部分：N-端部分为受体结合主要功能区；C-端部分可进一步分为膜外区、跨膜区和膜内区,其中膜外区在病毒膜融合过程中发挥主要作用。而跨膜区和膜内区构成蛋白的C-末端,与该蛋白的膜定位,转运和装配等功能密切相关。本实验室前期对鼠肝炎病毒(MHV) S蛋白C-末端的功能研究表明,位于膜内区的一些氨基酸基序有不同作用,其中Cys通过棕榈酰化及其与脂筏的膜定位影响病毒的复制水平,而负电残基则与S蛋白特异性装配有关等。本论文在此基础上进一步研究了冠状病毒的S蛋白膜内区正电荷氨基酸残基和Cys残基在其亚细胞定位中的作用；其次探索了HIV-1Env蛋白C-末端三个基序MPER, Y712XXL和LL855/856在不同来源细胞中的定位及转运相关功能；最后论文对人DC-SIGN和L-SIGN促进鼠冠状病毒的复制与表达进行了初步分析。结果显示,分别用三种不同来源的对照跨膜区及膜内区,以及用MHVS蛋白跨膜区及缺失突变的膜内区构建的EGFP融合蛋白均能在鼠Neuro-2a和人HeLa细胞系有效表达并正确定位。非跨膜融合蛋白MS2仅分布在细胞质,膜内区截短的人细胞受体融合蛋白PDGFR分布在胞内膜结构和细胞膜,而来源于Ⅰ型病毒膜蛋白跨膜区和膜内区融合蛋SHAH3与内质网(KDEL)有明显共定位。MHVS蛋白野生型跨膜区及膜内区融合蛋白Mwt与PDGFR呈类似的分布,而Cys富含区缺失突变(M6C和M2C)与内质网有共定位,并且M6C还与高尔基器(TGN46)有共定位。我们发现,HIV-1Env MPER缺失突变并不影响融合蛋白的亚细胞定位,而Y712XXL和LL855/856丙氨酸替代突变改变了融合蛋白细胞内的分布,可能与囊泡转运蛋白AP-1或AP-2相互作用有关。此外,重组MHV表达的融合蛋白,其在细胞内的分布与真核载体表达的分布基本一致,而且表达人DC-SIGN和L-SIGN的鼠NIH/3T3田胞提高了细胞对外源蛋白的表达水平,这些结果为进一步研究Ⅰ型病毒膜蛋白的转运机制奠定了很好的基础。