大鼠去细胞肾脏支架诱导损伤肾脏再生的研究

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:caiaikai
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本文主要从以下两个部分展开论述:  第一部分 去细胞肾脏支架的制备及检测  目的:  制备去细胞肾脏支架,检测其相关特性,为诱导损伤肾脏的再生奠定基础。  方法:  采用腹主动脉灌注法,依次灌注Triton X-100、SDS等去污剂,制备SD大鼠去细胞肾脏支架。H&E、PAS及Masson染色观察去细胞肾脏支架内细胞成分是否去除,以及ECM结构是否完整;SEM观察去细胞肾脏支架内微细结构的完整性,如Bowman氏囊、肾小球基底膜等是否保留;血管铸型观察支架内各级肾血管的结构;紫外-可见分光光度法检测肾脏支架内SDS的残留量;ELISA定量检测肾脏支架内IL-8、FGF、HGF、CTGF、TGF-β、VEGF以及PDGF等细胞因子的含量。  结果:  SD大鼠肾脏去细胞支架外观呈半透明胶冻状,H&E、PAS、Masson染色未观察到细胞核成分,而细胞外基质结构未见断裂。SEM观察到支架内Bowman氏囊、肾小球基底膜及肾内动静脉等结构完整、形态完好。血管铸型观察到肾内各级动静脉结构完整,未受损。紫外-可见分光光度法检测到支架内SDS的含量约为50.0±1.7μg/g,低于毒性范围(133μg/g)。ELISA定量检测到支架内各种细胞因子的含量如下:IL-843.99 ng/L,FGF63.7 ng/L,HGF25.92 ng/L,CTGF68.235ng/L, TGF-β96.835ng/L, VEGF207.7ng/L, PDGF983.585 ng/L。  结论:  通过血管灌注法能够制备外观通透的去细胞肾脏支架,其内细胞成分完全去除,而细胞外基质结构保存完好,微细结构未受损,肾内各级血管结构完整。支架内各种细胞因子均有一定程度的保留。支架内的去污剂含量极低,位于正常安全值范畴内。  第二部分 去细胞肾脏支架诱导损伤肾脏再生的研究  目的:  探索去细胞肾脏支架能否诱导损伤肾脏的再生。  方法:  选取8周龄雄性SD大鼠(重约250g)行水合氯醛腹腔麻醉后,开腹行左侧肾脏下半部分切除术。实验组:应用去细胞肾脏支架对部分切除肾脏创面进行断面-断面吻合;对照组:直接缝合创伤肾脏的断面。术后1周、2周、4周、8周对两组动物进行肾脏B超探查观察左侧肾脏的大小及血流变化情况;行99mTc-DTPA肾动态显像测定实验动物的双侧肾小球滤过率。各时间点处死实验动物,对左侧肾脏进行大体观察,比较肾脏的大小;石蜡包埋连续切片行H&E染色,观察损伤肾脏的病理变化;石蜡切片免疫荧光双标nestin、AQP-1观察肾内干细胞、近曲肾小管上皮细胞的变化情况,并用Image Pro-Plus进行分析。  结果:  实验组动物的左侧肾脏可见手术缝线明显下移,肾脏实质明显增大,而对照组并未见到这一现象。B超可见移植支架区域有明显血流信号通过。肾动态显像示:术后6周,实验组左肾的GFR明显高于对照组GFR。病理切片H&E染色观察示:实验组肾脏手术切缘处的肾实质呈现损伤-损伤后修复性再生的病理变化,移植支架区域呈现炎症细胞浸润-支架肉芽化的变化。免疫荧光观察到,实验组肾脏再生区域nestin在术后1周主要表达于再生区域的肾小球及肾小管,2周时在肾小管的表达逐渐减少,8周时仅在肾小球表达。经Image Pro-Plus分析,知nestin在实验组的表达强于对照组。AQP-1的荧光结果示:术后1周、2周均无法检测到,4周时恢复表达。  结论:  去细胞肾脏支架能够诱导损伤肾脏的切缘肾实质再生,移植的去细胞支架逐渐变成肉芽组织。在支架的作用下,损伤肾脏的功能得到较高程度的恢复。肾脏再生区域的干细胞明显高于对照组,而切缘处肾小管上皮细胞呈现损伤-损伤后修复性再生。
其他文献
为摸清峨山县水稻测土配方施肥和常规施肥氮、磷、钾肥利用率,通过水稻田间施用氮肥、磷肥和钾肥对比试验结果表明:配方施肥氮肥利用率52.91%、磷肥利用率29.12%、钾肥利用率
通过开展巴旦木氮肥总量控制试验,获得不同肥力水平和目标产量下的氮肥总量控制施肥参数,为确定巴旦木氮肥施肥方法及数量提供依据.rn一、试验材料rn供试化肥为尿素(含N46.3%
期刊
福建省大田梅林国有林场2008-2010年开展福建柏扦插繁殖试验,结果表明:福建柏扦插成活率与穗条木质化程度、扦插基质、扦插季节等密切相关,其中采用半木质化穗条、扦插基质以
摘 要:通过在日光温室内栽培不同樱桃番茄品种进行越夏设施栽培比较试验,以台湾农友种子公司的凤珠作对照。试验结果表明,参试的11个樱桃番茄品种中,综合评判SHLC-138表现更突出,适合在我地区越夏推广种植。  关键词:樱桃番茄;品种;比较试验  樱桃番茄是近些年兴起的一种水果型小番茄,外形美观,颜色艳丽,含有番茄红素、维生素等多种营养物质。口感较大番茄更为清甜,适合鲜食,综合效益高,在我地区广为种
为进一步检验炭基马铃薯专用肥料对改良土壤、增加地温、保水保肥和延长肥效功能,为农业部正式登记提供依据,2019年辽宁省新民市农业技术推广中心在大民屯镇前栏杆村马铃薯产
期刊
兽医在畜禽疾病防治工作中有着至关重要的作用,通过合理应用防治技术可降低养殖户的经济损失.在此之上,本文简要分析了兽医在畜禽疾病防治技术应用中存在的问题,并通过科学选
乡镇畜牧业的发展与乡镇畜牧兽医技术的提高有密切联系,现今我国畜牧兽医行业虽然较以往发达许多,但仍有诸多不足.本文从乡镇畜牧兽医技术推广带来的积极影响谈起,聚焦于“如
地球上的资源是有限的,尤其是土地资源,属于人类赖以生存的宝贵财富,为了能够发挥土地资源的利用效率,稻田生态养鱼技术应运而生.本文简略分析了稻田生态养鱼的效益,并阐述了
蛋鸡疾病是造成蛋鸡产蛋质量下降甚至死亡的主要原因,其防控工作至关重要.本文通过分析饲养环境对蛋鸡疾病防治的重要性,总结性地提出了蛋鸡生长生存中对于光照强度和时长、
摘 要:本文通过分析猪疾病防治工作中饲养环境不达标导致的猪更容易患病、发育成熟延迟、肉质口感降低等危害,提出了想要达到对猪疾病进行有力有效的防治,饲养环境就必须保持合理地饲养密度、清洁的饲养环境,以及必须严格按照国家规定的规章制度对猪进行必要的疫苗注射和相关防疫工作。  关键词:饲养环境;疾病防治;非洲猪瘟  随着全球经济水平的飞速发展,人民生活水平的日益提高,肉类已经成为百姓餐桌上常见的食材。据