甜瓜小热休克蛋白基因CmsHsp1/6/28和热激转录因子基因CmHsf18在果实发育中功能的初步分析

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甜瓜(Cucumis melo L.)属于葫芦科(Cucurbiteace)甜瓜属(Cucumis),是一年生草本植物。本研究从本实验室前期完成的甜瓜果实转录组数据中检索,获得在甜瓜果实不同发育时期特异性高表达的3个小热休克蛋白基因CmsHsp1/6/28和1个热激转录因子基因CmHsf18,其中CmsHsp1/28和CmHsf18在呼吸跃变期(C期)和跃变后期(P期)高表达,CmsHsp6在生长期(G期)高表达。对筛选出的4个候选基因进行了生物信息学和表达谱分析、进行了其cDNA克隆、超表达载体和基因组编辑载体构建和遗传转化分析等,取得的主要结果如下:(1)通过生物信息学分析,从甜瓜全基因组中鉴定出33个小热休克蛋白(CmsHsp)家族成员和23个热激转录因子家族(CmHsf)家族成员。4个基因的启动子中含有多种植物激素的应答元件,其中4个基因均含有脱落酸和乙烯应答元件,且CmsHsp1和CmsHsp28基因的启动子中含有生长素应答元件,CmsHsp1和CmHsf18中含有赤霉素应答元件,CmsHsp6中含有水杨酸应答元件。CmsHsp1位于0号染色体上,CmsHsp6位于4号染色体上,CmsHsp28位于10号染色体上,CmHsf18位于8号染色体上。(2)实时荧光定量PCR检测结果表明,4个基因在甜瓜根、茎、叶中的表达量水平极其显著低于甜瓜果实中的表达量(P-value<0.01),其中R期表达量是叶中表达量的10-22倍;CmsHsp1/28和CmHsf18在C期表达量最高,CmsHsp6在G期表达量最高,与转录组测序结果一致。(3)克隆了CmsHsp1/6/28和CmHsf18 4个基因的cDNA,其ORF分别为477bp、600 bp、478 bp和843 bp,并构建了4个基因的编辑载体和超表达载体。(4)采用子房注射法稳定遗传甜瓜,获得了大量T1转化种子,其PCR检测阳性率为8.8%13.3%。T1转化种子播种于日光温室,发现超表达CmsHsp28基因的T1甜瓜果实比对照果实晚熟4.4天,转编辑载体的T1果实比对照果实早熟3.1。以上结果表明CmsHsp28基因具有延缓甜瓜果实成熟的功能。
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